微精选

见图一

αCD7 在 EV 上的锚定促进 CD7 T 细胞恶性肿瘤对 EV 的摄取。

图一

（a） Molt-4、Raji、HeLa 人宫颈癌细胞系和 A549 人非小细胞肺癌细胞系在指定时间内对 1 μg PKH26 标记的 293T/EVs 的摄取的 FACS 分析。

（b） αCD7 结构示意图。

（c） 检测 EV 表面 αCD7 水平的示意图（左）。EV 表面 αCD7 水平的 FACS 分析（右）。

（d） FACS 定量 1 μg PKH26 标记的 EV（Ctrl/EVs 和 αCD7/EVs）的摄取≈ 1.85 × 10+9颗粒）由 Molt-4 和 Raji 细胞在指定时间内进行。

（e） Molt-4 和 Raji 细胞（绿色）在 4 小时内摄取 EV（红色）的代表性共聚焦图像（左）和定量（右）。比例尺，10 μm。每个点表示每个单元的 EV 点数。

（f） 和 （g） Molt-4 荷瘤 NOD/SCID/Il2rg−/−（NSG） 小鼠接受 100 μg （≈ 1.79 × 10 静脉注射11颗粒）VivoTrack 680 标记的 Ctrl/EVs 或 αCD7/EVs，并在 24 小时后进行评估。（f） 这些小鼠在指定器官和肿瘤中 EV 摄取的代表性 IVIS 图像（上图）和定量（下图）。

（g） 这些小鼠的 Molt-4 肿瘤切片中 VivoTrack 680 标记的 EV 的代表性共聚焦图像（左）和定量（右）。比例尺，50 μm。每个点代表一个视野。数据代表了三个独立实验 （n = 3）。误差线表示 SD ±均值（ns，不显著，*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，****p < 0.0001，[a]—[g] 中未配对的学生 t 检验）。EV，细胞外囊泡;FACS，荧光激活细胞分选;静脉注射;IVIS，活体成像系统。

见图二

载有 CytC 的 αCD7/EVs 可有效抑制 CD7 T 细胞恶性肿瘤。

（a）–（c） Molt-4 细胞与 PBS、10 μg CytC 或 1.79 × 10 一起孵育+10Ctrl/EVs、αCD7/EVs、Ctrl/EVs/CytC 或 αCD7/EVs/CytC 的颗粒 48 小时 （n = 3）。（a） 凋亡细胞的 FACS 分析 （%）。

（b） 凋亡细胞的定量 （%）。

（c） 这些细胞活力的 CCK8 分析。

（d） 这些细胞中细胞凋亡蛋白标志物的 WB 分析。

（e）–（i） 荷瘤 NSG 小鼠静脉注射 100 μg （≈ 1.79 × 1011颗粒）每 3 天一次 Ctrl/EVs/CytC 或 αCD7/EVs/CytC，共 5 次 （n = 5）。（e） 小鼠肿瘤模型构建和治疗方案示意图。

（f） 根据肿瘤大小评估肿瘤进展。

（g） 这些小鼠的 Molt-4 肿瘤组织的 TUNEL 免疫荧光染色的代表性图像。比例尺，50 μm。

（h） 小鼠 Molt-4 肿瘤组织中裂解的半胱天冬酶 3、8 和 9 的代表性 IHC 染色图像。比例尺，100 μm。

（i） 在 （g） 中定量每个报告区域的凋亡细胞，在 （h） 中对裂解的半胱天冬酶 3、8 和 9 IHC 染色进行定量。每个点表示随机采集的图像（n = 5 英寸 （f），n = 23–27 英寸 （g）。数据代表了三个独立的实验。误差线表示 SD ±均值（ns，不显著，*p < 0.05，**p < 0.01，****p < 0.0001，单因素方差分析后跟 [b]–[i] 中的 Tukey 检验）。CytC，细胞色素 C;EV，细胞外囊泡;IHC，免疫组织化学。

见图三

αCD7 修饰改变 EV 内吞作用并促进 nEV 细胞毒性。

图三

（a） 1 μg 4 h 摄取的 FACS 分析 （≈ 1.85 × 109颗粒）由用指定的内吞抑制剂预处理 1 小时 （n = 3） 的 Molt-4 细胞的 PKH26 标记的 Ctrl/EVs 或 αCD7/EV。

（b） PKH26 标记的 EV 与网格蛋白（绿色）共定位的代表性共聚焦图像（左）。比例尺，10 μm。PKH26 标记的 EV 和网格蛋白（绿色）的荧光谱分析和共定位比分析（右）（n = 3）。

（c） PKH26 标记的 EV 与 Lamp1（绿色）共定位的代表性共聚焦图像（左）。比例尺，10 μm。PKH26 标记的 EV 和 Lamp1（绿色）（n = 3）的荧光谱分析和共定位比分析（右）。

（d） CytC 示意图680+下腔室中 Molt-4 细胞的 nEV 摄取。

（e） CytC 的代表性共聚焦图像（左）和定量（右）680（红色）在下腔室 （n = 3） 的 Molt-4 细胞（绿色）中。比例尺，2 μm。每个点表示 CytC 的平均荧光强度680每个单元格。

（f） nEVs/Ctrl 的 FACS 分析680和 nEV/αCD7680用 20 μg （≈ 3.58 × 10 处理后，从等数量的 Molt-4 细胞中分离出来10粒子）680或 10 μg （≈ 1.79 × 1010颗粒）680（g） 用 nEVs/Ctrl 处理 Molt-4 细胞680和 nEV/αCD7680从相同数量的 Molt-4 细胞中分离 48 小时。通过 CCK8 测定法测定这些细胞的活力 （n = 3）。

（h） nEV（来自用 PBS 处理的 Molt-4 细胞）、nEV/Ctrl 和 nEV/αCD7 中 CytC 的 WB 分析。

（i） 10 μg nEV/αCD7 或 nEVs/Ctrl 对指定肿瘤细胞的促凋亡作用的 FACS 分析（左）和定量（右）[n = 3]。（j） Molt-4 细胞用 5 μM SMasei 预处理 2 h，然后用 αCD7/EVs/CytC 处理 48 h。通过 CCK8 测定法测定这些细胞的活力 （n = 3）。

（k） 小鼠肿瘤模型构建和治疗方案示意图。（l） 瘤内注射 2.5 μg/g SMasei 的荷瘤 NSG 小鼠的肿瘤大小，有或没有静脉注射 100 μg αCD7/EVs/CytC （n = 5）。数据代表了三个独立的实验。误差线表示 SD ±均值（ns，不显著，*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，****p < 0.0001;[a] 中为双向方差分析，后跟多重比较检验;[b]—[e] 中为未配对的学生 t 检验;[g]–[l] 中为单因素方差分析，后跟 Tukey 检验。CytC，细胞色素 C;EV，细胞外囊泡;FACS，荧光激活细胞分选;静脉注射。

见图四

Bcl2 沉默增强了 αCD7/EVs/CytC 对 CD7 T 细胞恶性肿瘤的治疗作用。

图四

（a）–（c） 用 10 μg （≈ 1.79 处理 Molt-4 细胞 10 ×+10αCD7/EVs/siNC、αCD7/EVs/siBcl2、αCD7/EVs/CytC 或 αCD7/EVs/CytC/siBcl2 的颗粒）48 h。（a） 这些细胞中 Bcl2 蛋白的 WB 分析。

（b） 使用 JC-1 染料对 MOMP 进行 FACS 分析（左）和定量（右）。JC-1 荧光从 JC-1 聚集体到 JC-1 单体的变化证明了线粒体膜去极化。CCP 是一种线粒体电子传递链抑制剂，用作阳性对照。

（c） 这些细胞凋亡的 FACS 分析（左）和定量（右）（n = 3）。（d）–（f） Molt-4 荷瘤 NSG 小鼠静脉注射 100 μg （≈ 1.79 × 1011颗粒）每 3 天一次 αCD7/EVs/CytC 或 αCD7/EVs/CytC/siBcl2，共 5 次 （n = 5）。

（d） 根据肿瘤大小评估肿瘤进展。

（e） 这些小鼠的 Molt-4 肿瘤组织的 TUNEL 免疫荧光染色的代表性图像（左）和定量（右）。比例尺，50 μm。每个点表示随机采集的图像 （n = 5）。

（f） 这些小鼠 Molt-4 肿瘤组织中 Bcl2 蛋白的代表性 IHC 图像（左）和定量（右）。比例尺，100 μm。每个点表示随机采集的图像 （n = 21）。

（g）–（j） 静脉注射 100 μg （≈ 1.79 × 10 的 T-ALL NSG 小鼠11颗粒）Ctrl/EVs/CytC/siBcl2 或 αCD7/EVs/CytC/siBcl2 每 3 天一次，共 5 次 （n = 5）。（g） T-ALL 小鼠模型构建、治疗方案和分析示意图。

（h） T-ALL 进展（左）和 Molt-4-Luci 信号强度定量（右）的代表性 IVIS 图像。（i） 这些小鼠的生存曲线。

（j） 外周血、骨髓和脾脏中 Molt-4-Luci 细胞浸润的 FACS 分析（左）和定量（右）。数据代表了三个独立的实验。误差线表示 SD ±均值（ns，不显著，*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，****p < 0.0001;单因素方差分析后跟 [b]–[j] 中的 Tukey 检验;[i] 中的对数秩检验）。CytC，细胞色素 C;EV，细胞外囊泡;FACS，荧光激活细胞分选;IHC，免疫组化;IVIS，活体成像系统;MOMP，线粒体外膜透化。

见图五

αCD7/EVs/CytC/siBcl2 有效抑制化疗耐药的 CD7 T 细胞恶性肿瘤。

图五

（a） 用指定浓度的 Dox 处理的 Molt-4 细胞和 CR-Molt-4 细胞活力的 CCK8 分析。

（b） 10 μg 处理的 Molt-4 细胞和 CR-Molt-4 细胞凋亡的 FACS 分析（左）和定量（右≈ 1.79 × 10+10颗粒）αCD7/EVs/CytC/siBcl2 或 100 ng/mL Dox 持续 24 小时。

（c） 小鼠肿瘤模型构建和治疗方案的示意图。荷瘤 NSG 小鼠静脉注射 100 μg （≈ 1.79 × 1011颗粒）或 2.5 μg/g Dox 每三天一次，共 5 次 （n = 5）。

（d） 根据肿瘤大小评估肿瘤进展。

（e）–（h） 静脉注射 100 μg （≈ 1.79 × 10 的 T-ALL NSG 小鼠11颗粒），2.5 μg/g Dox 或 100 μg（≈ 1.79 × 1011颗粒）αCD7/EVs/CytC/siBcl2 + 2.5 μg/g Dox 每 3 天一次，共 5 次 （n = 5）。（e） Molt-4-Luci 信号强度的代表性 IVIS 图像（左）和定量（右）。

（f） 外周血、骨髓和脾脏中 Molt-4-Luci 和 CR-Molt-4 细胞浸润的 FACS 分析（左）和定量（右）（n = 3）。（g） 这些小鼠的生存曲线。

（h） T-ALL 浸润肝叶的代表性 H&E 染色图像（左）和定量（右）（n = 4-3）。数据代表了三个独立的实验。误差线表示 SD ±均值（ns，不显著，*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001，****p < 0.0001;[b] 中为双向方差分析，后跟多重比较检验;[d]–[h] 中为单向方差分析，后跟 Tukey 检验;[g] 中为对数秩检验]。CytC，细胞色素 C;EV，细胞外囊泡。

见图六

αCD7/EVs/CytC/siBcl2 具有高生物学安全性和低免疫原性。

图六

（a）–（d） BALB/c 小鼠静脉注射 100 μg （≈ 1.79 × 1011颗粒）每三天一次 αCD7/EVs/CytC/siBcl2 共 5 次 （n = 5）。（a） 小鼠主要器官的代表性 H&E 染色图像。比例尺，100 μm。

（b） 小鼠的血清 ALT、AST、BUN 和 SCR 水平。

（c） 小鼠外周血中中性粒细胞的 FACS 分析（左）和定量（右）（LIN−指 CD3−和 B220−)。

（d） Ly6C 的 FACS 分析（左）和定量（右）你好经典单核细胞和 Ly6C瞧小鼠外周血中的非经典单核细胞 （LIN−指 CD3−、B220−和 Ly6G−).（e） 和 （f） BALB/c 小鼠静脉注射 100 μg （≈ 1.79 × 1011颗粒）或皮下注射 αCD7/EVs/CytC/siBcl2 的混合物或 CFA 的混合物。

（e） αCD7/EV/CytC/siBcl2 特异性抗体水平的 ELISA 示意图（左）和分析（右）。

（f） 分离小鼠的脾细胞，并用 5 μg αCD7/EV/CytC/siBcl2 裂解物再刺激 24 小时。ELISA 检测上清液中 IL-2 和 IFN-γ 水平。

（g） BALB/c 小鼠静脉注射 100 μg （≈ 1.79 × 1011颗粒）每三天一次 αCD7/EVs/CytC/siBcl2 共 5 次 （n = 5）。小鼠脾脏、淋巴结和外周血中 T 细胞的 FACS 分析（左）和定量（右）。

（h） 10 μg 处理的 Molt-4 和人 T 细胞中凋亡细胞 （%） 的 FACS 分析（左）和定量（右）（≈ 1.79 × 1010颗粒）。

（i） 1 μg 摄取的 FACS 分析（左）和定量（右）（≈ 1.85 × 109颗粒）的 PKH4 标记的 EV 和人类 T 细胞。数据代表了三个独立的实验。误差线表示± SD（*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001;[b]–[h] 中的未配对学生 t 检验;[e] 和 [i] 中后跟单向方差分析;[d] 和 [f] 中后跟双向方差分析的多重比较检验）。CytC，细胞色素 C;EV，细胞外囊泡;FACS，荧光激活细胞分选。

好了，今天的文献解读就到这儿来，我们下期再见！如果你正在开展临床研究.需要方案设计.数据管理.  数据分析等支持.也随时可以联系我们。