|
GSE14407 数据集从 GEO 数据库中选取用于分析，基于校正后的 P 值< 0.05 和|log2 FC（fold change）|≥1 的标准，用于筛选差异表达基因。根据筛查标准，对卵巢癌和正常卵巢样本的基因表达水平进行了差异分析，结果共计 5145 个差异表达基因，其中包括 4,027 个上调基因和 1,118 个下调基因。生成了差异表达基因的层级聚类和火山图（见图 1）。研究显示，FOXL2 是卵巢癌下调基因之一，这与作者之前的研究一致。卵巢癌中差异表达基因的筛查。数据集GSE34526 基因表达综合目录。使用 R 4.3.2 版本中的 GEO 查询包。在查询 NCBI 数据库时，FOXL2 的基因序列分析显示，FOXL2 基因长度约为 2.7 Kb，位于第 3 号染色体长臂的 3q22.3 区域（见图）。2A）。它编码一个叉头转录因子，由 376 个氨基酸组成，其中 52–142 个氨基酸形成跨膜结构域蛋白（见图 2B）。成功提取了 KGN 细胞的总 RNA。每组细胞的 OD 值均由紫外分光光度计测量。KGN 细胞的 OD 值均在 1.8 到 2.0 之间，表明 RNA 纯度良好。引物设计的 GAPDH 片段长度为 230 碱基对，FOXL2 片段长度为 260 碱基对。通过比较标记带，凝胶成像结果清晰显示了对应 GAPDH mRNA（1–6）和 FOXL2 mRNA（7–12）的带，证明 GAPDH 和 FOXL2 基因的表达在对照组和五个不同浓度实验组中均被检测到（见图）。3）、充分证明引物的准确性和实验的可行性。十二组细胞中总 mRNA 1%琼脂糖凝胶电泳结果。1–6 和 7–12 分别代表 DMSO 中的 GAPDH 和 FOXL2，分别与 100 nM、1、5、10、50 μM JNK 抑制剂群共隐。数字 13 指的是 DNA 标记（TIANGEN）。参考基因和目标基因的荧光定量 PCR 扩增曲线令人满意，单峰熔解曲线表明无引物二聚体。各组的相对 mRNA 表达水平采用 2−ΔΔCt 方法计算。JNK 抑制剂组的 FOXL2 mRNA 表达低于参考组，实验组观察到 FOXL2 基因的 mRNA 表达水平最低，达到 1μM 的最终浓度。这一差异具有统计学意义（P < 0.05，见图 4）。这些发现表明，一方面，FOXL2 基因受 JNK 调控，且可能被某种机制抑制其表达。在使用 JNK 抑制剂处理后，通过 qRT-PCR 检测到 KGN 细胞中 FOLX2 的 mRNA 表达水平。（*p < 0.05;**p < 0.01）在以 1 微 M 浓度处理 JNK 抑制剂后，48 小时后从正常对照组、实验组（JNK 抑制剂组）中提取蛋白质，并进行电泳。主要抗体为 GAPDH 抗体和 FOXL2 抗体。JNK 抑制剂组中 FOXL2 蛋白的表达显著降低。实验组细胞中 FOXL2 蛋白的表达较对照组下降了 40%，且差异具有统计学显著性（P < 0.05，图 5）。二维迁移实验通过用 DMSO 和 JNK 抑制剂（1 微米）处理细胞 48 小时进行。在培养皿上划出刮痕，并在 48 小时后评估细胞的平均迁移距离。该检测法通过观察细胞在形成刮痕后迁移到被刮伤区域的能力，反映了细胞的迁移特性，广泛应用于癌细胞侵袭和迁移的研究。KGN 细胞的迁移能力可能与 FOXL2 基因的表达水平有关。作者的研究表明，JNK 抑制剂 SP600125 能显著降低 FOXL2 的表达（如本文结果部分的 qRT-PCR 和西方印迹实验所示）。JNK 抑制剂组的迁移能力低于对照组。JNK 通过 FOXL2 部分抑制细胞迁移（见图）。6）。通过光学显微镜和 MTT 测定，测量了 KGN 细胞在 24 小时、48 小时和 72 小时的不同时间点。通过显微观察，三组细胞在 24 小时内迅速增殖，48 小时覆盖率约达 80%，光学显微镜下 72 小时时组间无显著差异。24 小时时测得的吸收值为对照组 0.3±0.05，实验组 0.31±0.08，P=0.02;48小时时，吸收值为 0.70±0.01 和 0.65±0.05，P=0.03;在 72 小时，吸收值为 1.01±0.04 和 0.75±0.05，P=0.03。上述定量数据对多个独立样本进行了方差分析，显示出统计学上显著的差异，P < 0.05。不同时间点的 KGN 细胞增殖曲线显示实验组的数值低于对照组，表明其增殖能力低于对照组。MTT 结果显示，JNK 抑制剂治疗在 72 小时后抑制了 KGN 细胞的增殖（见图 7）。 总结 总之，FOXL2 基因在卵巢颗粒细胞中表达较高。FOXL2 可通过 JNK 抑制卵巢颗粒细胞的增殖。它可能作为一种新型肿瘤抑制剂，在卵巢癌转移和复发中具有潜在价值。然而，为了深化对其机制的理解，仍需进一步研究。
|