陆抑非早年在家乡拜李西山为师，后又师从陈迦盦，30岁时成为吴湖帆的弟子，进入“梅景书屋”学习。24岁时，他开始在上海美专任教，长达十五年，并兼任新华艺专、苏州美专的教职。1956年，他成为上海中国画院首批画师。1959年，受潘天寿院长邀请，陆抑非到浙江美术学院（现为中国美术学院）执教。
陆抑非擅长花鸟画，工笔与写意皆精，尤其在兼工带写方面成就斐然。他的作品题材丰富，风格淡雅而富有生机。在工笔方面，他上溯两宋，写意则承接元、明传统，兼工带写则以宋画为范本，力追吕纪、林良，并广泛吸收青藤、白阳的艺术精髓。
早年，他深受南田、新罗作品的影响，笔触轻灵，设色清新，尤其得益于恽氏风格，因而有“陆牡丹”的美誉。他与唐云、张大壮、江寒汀并称江南花卉四才子。20世纪60年代后，陆抑非移居杭州，画风也随之转变，吸收了大写意的长处，从工笔转向写意，笔墨更加生辣，色调更为浓丽，尽管在格调上偶有不够娴雅之处，但整体上依然艳而不俗，工而不滞。
晚年，陆抑非的艺术风格再次变革，深入探索徐青藤、陈白阳的艺术境界，同时旁及八大山人、石涛、吴昌硕等大家。他还善于以书法入画，笔墨朴茂而富有生辣之气，同时不失清丽典雅的韵味。