BMC Cancer | Lnc-MAP3K13-3:1通过调控miR-6894-3p/SHROOM2影响肝细胞癌动力学

导语

今天给同学们分享一篇生信文章“Regulatory role of lnc-MAP3K13-3:1 on miR-6894-3p and SHROOM2 in modulating cellular dynamics in hepatocellular carcinoma ”，这篇文章发表在BMC Cancer 期刊上，影响因子为3.4。

结果：

肝癌细胞中 lnc-MAP3K13-3：1 和 mir-6894-3p 表达水平的 qPCR 分析

如图所示。在人类肝癌细胞系中，HepG2、HuH-7 和 Li-7 中，HepG2 细胞表现出最高的 mRNA 表达水平——lnc-MAP3K13-3：1 和 miR-6894-3p。相比之下，HuH-7 细胞的 mRNA 表达水平 Lnc-MAP3K13-3：1 显著降低（P < 0.05），miR-6894-3p 表达也降低。同样，Li-7 细胞的 lnc-MAP3K13-3：1 mRNA 表达低于 HepG2 细胞，miR-6894-3p 表达显著减少（P < 0.05）。基于这些发现，选取了表现出相对较低表达水平 MAP3K13 的 HuH-7 和 Li-7 细胞进行进一步实验。

三株肝癌细胞系中 lnc-MAP3K13-3：1 和 miR-6894-3p 的表达水平。（A）比较 HepG2、HuH-7 和 Li-7 细胞系间 lnc-MAP3K13-3：1 表达水平。统计显著性以星号（*）表示（P < 0.05，较 HuH-7 细胞）。（B）HepG2、HuH-7 和 Li-7 细胞系间 miR-6894-3p 表达水平比较。星号（*）表示相对于 Li-7 细胞具有统计学显著差异（P < 0.05）

转染后的 qPCR 结果

如图所示。2，HuH-7 细胞成功转染 LNC-MAP3K13-3：1 过表达载体和 miR-6894-3p 模拟株。与空白对照组和空载体组相比，lnc-MAP3K13-3：1 过表达组和 lnc-MAP3K13-3：1 过表达+拟态组表现出显著升高的 lnc-MAP3K13-3：1 和 miR-6894-3p 表达水平（P < 0.05）。此外，lnc-MAP3K13-3：1 过表达组和 lnc-MAP3K13-3：1 过表达+模拟组的 Caspase9 表达水平高于空白对照组。

在 lnc-MAP3K13-3：1 过表达及 miR-6894-3p 模拟转染后，HuH-7 和 Li-7 细胞 RNA 表达的变化。（A）在 lnc-MAP3K13-3：1 过度表达后，HuH-7 和 Li-7 细胞表达发生变化。统计显著性通过星号（*）（P < 相对于对照组 0.05）和标签（#）（P < 相对于空载体过度表达组 0.05）表示。（B）miR-6894-3p 拟株转染后 HuH-7 和 Li-7 细胞表达变化。星号（*）表示与对照组显著差异（P < 0.05），标签（#）表示与拟态负对照组（NC）组的差异。（C）在 Lnc-MAP3K13-3：1 过表达后，HuH-7 和 Li-7 细胞中 lnc-MAP3K13-3：1 表达水平，无论是否进行 miR-6894-3p 模拟共转染。统计显著性以星号（*）（P < 相较对照组 0.05）和标签（#）（P < 相对于空向量组 0.05）表示。（D） miR-6894-3p 在 miR-6894-3p 拟株和/或 lnc-MAP3K13-3：1 过表达后，HuH-7 和 Li-7 细胞的表达水平。显著性通过星号（*）（P < 相对于对照组 0.05）和标签（#）（P < 相对于拟态 NC 0.05）表示。（E） miR-6894-3p 模拟转染或 LNC-MAP3K13-3：1 过表达后，HuH-7 和 Li-7 细胞中 Caspase3 表达水平。显著性通过星号（*）（P < 相较对照组 0.05）和标签（#）（P < 相较 NC 0.05）表示。（F）经 miR-6894-3p 拟株或 LNC-MAP3K13-3：1 过表达后，HuH-7 和 Li-7 细胞中 Caspase9 表达水平。星号（*）表示统计显著性（*P < 0.05 相较对照组），标签（#）（P < 相对于 NC 0.05）。（G） miR-6894-3p 拟态或 lnc-MAP3K13-3：1 过表达后，HuH-7 和 Li-7 细胞表达水平 SHROOM2。统计显著性通过星号（*）（P < 相对于对照组 0.05）和标签（#）（P < 0.2005 年与 NC 相比）

同样，lnc-MAP3K13-3：1 过表达组和 lnc-MAP3K13-3：1 过表达+拟态组的 SHROOM2 表达水平均相较空白对照组有所上升，其中 lnc-MAP3K13-3：1 过表达组的表现显著增加（P < 0.05）。此外，使用 miR-6894-3p 模拟株处理导致 Caspase9 表达减少，SHROOM2 表达增加。这些发现表明，lnc-MAP3K13-3：1 和 miR-6894-3p 拟态的过度表达会增强细胞中的 SHROOM2<[> 和 Caspase9 表达，而 miR-6894-3p 拟态可能调节 lnc-MAP3K13-3：1 的功能。

CCK8 比较增殖检测

如图所示。3，与空白对照组相比，lnc-MAP3K13-3：1 过表达组和 LNC-MAP3K13-3：1 过表达+拟态组的细胞增殖均显著减少（P < 0.05）。然而，当 miR-6894-3p 拟株被引入 lnc-MAP3K13-3：1 过表达基时，细胞增殖有所增加。这些发现表明，lnc-MAP3K13-3：1 过表达抑制细胞增殖，而 miR-6894-3p 拟态则能减弱这种抑制作用。

通过 CCK-8 检测评估了 LNC-MAP3K13-3：1 过表达及 miR-6894-3p 拟株转染后 HuH-7 和 Li-7 细胞的细胞增殖。在通过 lnc-MAP3K13-3：1 过表达和 miR-6894-3p 模拟转染后，测量了 HuH-7 和 Li-7 细胞的增殖率。统计显著性以星号表示（*）（P < 相对于对照组 0.05）

细胞凋亡

1，LNC MAP3K13-3：1 过表达对照组的凋亡率显著增加（P < 0.05）、LNC-MAP3K13-3：1 过表达组、空载体过表达+拟态 NC 组、空载体过表达+miR-6894-3p 拟态组、lnc-MAP3K13-3：1 过表达+拟态 NC 组，以及 lnc-MAP3K13-3：1 过表达+miR-6894-3p 拟态组相较于空白对照组。这些结果表明，lnc-MAP3K13-3：1 过表达和 miR-6894-3p 拟株对 HuH-7 和 Li-7 肝癌细胞具有促凋亡效应。

细胞周期分析

2，HuH-7 细胞在 lnc-MAP3K13-3：1 过表达对照组、lnc-MAP3K13-3：1 过表达组、空载体过表达+拟态 NC 组、空载体过表达+miR-6894-3p 拟态组、lnc-MAP3K13-3：1 过表达+拟态 NC 组以及 lnc-MAP3K13-3：1 过表达+miR-6894-3p 拟态组中，G2/M 期细胞比例均较空白对照组增加。在 Li-7 细胞中，lnc-MAP3K13-3：1 过表达及与 miR-6894-3p 拟态的结合导致 S 期增加，G0/G1 期减少。

细胞划痕测定

如图所示。4，HuH-7 肝癌细胞的迁移能力在 lnc-MAP3K13-3：1 过表达组和 lnc-MAP3K13-3：1 过表达+miR-6894-3P 拟株组均显著提升，较空白对照组为高（P < 0.05）。此外，lnc-MAP3K13-3：1 过表达+miR-6894-3p 拟态组的迁移能力高于单用 lnc-MAP3K13-3：1 过表达组。这表明 lnc-MAP3K13-3：1 过表达和 miR-6894-3p 拟态体均促进 HuH-7 细胞的迁移。相比之下，Li-7 肝癌细胞在 lnc-MAP3K13-3：1 过表达组和 lnc-MAP3K13-3：1 过表达+miR-6894-3p 拟态组中均表现出显著下降，而空白对照组和空载体组则较之 P< 0.05。此外，lnc-MAP3K13-3：1 过表达+miR-6894-3p 拟态组的迁移能力低于单用 lnc-MAP3K13-3：1 过表达组，表明 lnc-MAP3K13-3：1 过表达和 miR-6894-3p 均抑制 Li-7 细胞的拟态迁移。

细胞刮痕测定，评估 HuH-7 和 Li-7 细胞在 LNC-MAP3K13-3：1 过表达及 miR-6894-3p 模拟转染后的迁移情况。答：在不同实验条件下，HuH-7 和 Li-7 细胞在 lnc-MAP3K13-3：1 过表达和 miR-6894-3p 模拟转染后细胞迁移的代表性图像。A-A：空白对照组。A-B：非中核-MAP3K13-3：1 对照组。A-C：lnc-MAP3K13-3：1 的过度表达群。A-D：空载体过度表达 + 模拟 NC。A-E：空载体过表达 + miR-6894-3P 拟态基团。A-F：lnc-MAP3K13-3：1 过表达 + 拟态 NC 组。A-G：lnc-MAP3K13-3：1 过表达 + miR-6894-3P 拟态基团。A-H：细胞迁移的定量分析。B：在 lnc-MAP3K13-3：1 过表达及 miR-6894-3p 拟株转染后，HuH-7 和 Li-7 细胞的定量迁移分析。统计显著性以星号表示（*）（P < 相对于对照组 0.05）双荧光素酶测定

双荧光素酶检测结果如图所示。5，表示 LNC-MAP3K13-3：1 WT + miR-6894-3p 组的荧光强度显著低于 lnc-MAP3K13-3：1 WT 组，显示统计学上显著差异（*P < 0.05）。荧光的这种减少确认了 lnc-MAP3K13-3：1 直接靶向并结合 miR-6894-3p。同样，SHROOM2 WT + miR-6894-3p 组的荧光强度显著低于 SHROOM2 WT 组，也显示出统计学上显著的差异（*P < 0.05）。这些结果证实 miR-6894-3p 直接靶向并结合 SHROOM2。

用于 LNC-MAP3K13-3：1、miR-6894-3p 和 SHROOM2 相互作用的双荧光素酶测定。（A）证明 lnc-MAP3K13-3：1 与 miR-6894-3p 相互作用的结果。（B）证明 miR-6894-3p 与 SHROOM2 相互作用的结果。注：星号（*）表示相对于对照组的统计显著性，P < 0.05。

总结

总之，Lnc-MAP3K13-3：1 通过靶向 miR-6894-3p 调节 SHROOM2，从而调控肝癌细胞的增殖和凋亡。这些发现为肝癌靶向治疗策略提供了新颖视角。