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大口黑鲈诺卡氏菌又名大口黑鲈致死性结节病（lethal sarcoidosis of largemouth bass）、结节病（sarcoidosis），俗称烂身病（rotten body disease）等。

【病原或病因】

病原为鰤诺卡氏菌（Nocardia seriolae），属放线菌门（Actinobacteria）、放线菌纲（Actinobacteria）、放线菌目（Actinomycetales）、诺卡氏菌科（Nocardi-aceae）、诺卡氏菌属（Nocardia）。革兰氏阳性菌，菌体呈细长短杆状，或细长分枝状，常断裂成杆状、球状体，大小为（0.2~1.0）μm×（2.0~5.0）μm，丝状体长10~50μm；菌体大致由两层结构构成。外层雾状灰色物质，为诺卡氏菌细胞膜、细胞壁以及具有复杂结构的类脂质。内层由深灰色絮状物质构成（图1）。丝状体单个、成对、“Y”或“V”字状排列或排列成栅状，并具膨大或棒状末端。基丝发达，呈分枝状，气丝较少并形成长短不一的孢子链。好氧，不运动，具抗酸性，不生孢子（图2）。在TSA 培养基上形成白色沙粒状菌落；在BHII 固体培养基上28℃培养3d后才有少许菌落生长，3~7d形成沙粒状淡黄色菌落，粗糙易碎，边缘不整齐，在表面形成褶皱。在BHI液体培养基中，菌体因呈粗沙粒状而附着在管壁或沉于底部，振荡试管才可见菌体呈明显沙粒状；在血平板培养基上菌落呈白色沙粒状（图3）。25℃培养4~5d出现小的菌落，两周后形成疣状、致密的硬菌落，颜色由淡黄色变为橙黄色。生长温度为12~32℃，最适温度为25~28℃；盐度为0~45，最适盐度为0~10；pH 5.8~8.5，最适pH为6.5~7。

图1

【临床症状】

该病在发病初期症状不明显，仅表现患病鱼食欲减退或不摄食，离群独游于水面池边，体色变黑（图4）；随后体表出现溃疡灶和出血点，鳍条充血、出血，鳃黏液增多，部分鱼鳃丝边缘缺损，出现出血点，贫血（图5）。具有肉眼可见的白色或淡黄色结节是该病主要特征。

根据外观症状可分躯干结节型和鳃结节型两种类型：①躯干结节型。躯干部的皮下脂肪组织和肌肉发生溃疡，外观呈现大小不一、形状不规则的结节，在所有的病灶处有炎症反应。②鳃结节型。鳃褪色，鳃丝发白，基部形成针尖大小的乳白色或黄色结节（图6）。

剖检可见，肝、脾肿大、淤血，或有大量出血点，鳔腔内有积液，肝、脾、肾、肠系膜、鳔膜等处布满结节状的小白点，白色结节直径可达1~2 mm，个别结节直径超过5mm（图7）。个别严重的病鱼，肾、鳃耙骨和肌肉形成较大的白色隆起脓疱，剖开后流出白色或带红色血液脓汁，这种脓汁为腐烂的肌肉或脂肪组织并混有血细胞和大量的诺卡氏菌。

图4

图5

图6

图7    

【病理学特征】

患病大口黑鲈皮肤溃疡灶、肝、脾、肾、心脏和鳃组织会出现不同程度肉芽肿结节状病变。

肉芽肿分主要分为3个时期：初期，肉芽肿只有坏死病灶；中期，成熟肉芽肿出现3层结构，即中心为红染的坏死组织碎片，并见蓝染的鰤诺卡氏菌和钙盐沉着，中层为增生并趋于坏死的结缔组织和炎性细胞，外层为多层稀疏排列的结缔组织及大量上皮样细胞（单核细胞来源）；后期，陈旧肉芽肿的坏死灶很少成熟，被外周结缔组织代替机化。肝组织内散布有少量肉芽肿，以靠近表面的肝组织区域分布较多。脾组织可见大量密集的肉芽肿，结缔组织明显增多、增厚，脾实质淋巴细胞减少，脾血窦扩张充血，部分毛细血管内皮细胞坏死。脾肉芽肿分布较密，结缔组织及上皮样细胞层较厚，红染的坏死组织中心比肝组织内的肉芽肿小，且有的已经被外周结缔组织取代。肾组织偶见少量蓝染的未成熟肉芽肿病变区域，与其他内脏组织肉芽肿病变区域相比，直径较大，约600μm，周边很少或缺乏结缔组织及上皮样细胞的包裹。心脏组织多见成熟度不高的肉芽肿病变区域，也有部分形成成熟的3层肉芽肿结构。鳃上可见较多坏死小肉芽肿，造成鳃小片病变部位膨大，鳃小片基部大量炎性细胞浸润，病灶内红细胞堆积，并伴有炎性细胞浸润，部分细胞坏死崩解，外周有残存的鳃小片组织包裹（图8）（何晟毓等，2020）。

皮肤溃疡灶在病灶处从外到内可见皮肤表皮层分离，真皮层坏死崩解，呈一片红染无结构的现象，结节深入病变肌肉组织（图9A）。病灶边缘真皮层可见毛细血管充血，疏松结缔组织有大量炎性细胞浸润（图9B），坏死灶内可见大量散在沉着钙盐或鰤诺卡氏菌的蓝染小团块（图9C、D）（何晟毓等，2020）。

图8

图9

【流行与危害】

大口黑鲈诺卡氏菌病是一种慢性、传染性、全身性疾病，潜伏期长，发病初期不易发现，病鱼除摄食量减少直至不摄食外没有明显症状。一般从感染到发病，直至死亡至少需要15~20d，持续时间可长达5~6个月。但当环境一旦发生较大改变（如暴雨过后），感染的病鱼即会出现大量死亡。

该病的流行季节为4-9月，流行高峰为6-9月，流行水温15~32℃，25~28℃是流行高峰。该病主要危害成鱼，发病率为35%，最高可达80%，死亡率为20%~30%，即使病鱼不死也严重影响成鱼的商品价值。

【诊断方法】

根据大口黑鲈诺卡氏菌病可形成肉眼可见的白色或黄色结节（实际上是肉芽肿）的特征以及流行病学的情况、病原分离培养等可以做出初步判断（图10、图11）。

通过环介导恒温扩增技术（LAMP）检测，以及特异性PCR 检测，观察到在1000 bp条带处出现预期大小（1069 bp）的单一明亮条带，可确诊（图12），1~4分别为从自然患病病鱼各部位溃疡灶、鱼鳔腔积液等分离的病原菌，使用特异性引物检测诺卡氏菌，0为对照的维氏气单胞菌无条带产生，而1~4均有单一明亮的条带出现，根据条带强弱可分辨弱阳性和强阳性，1、2、4为诺卡氏菌强阳性，3为弱阳性5~7为阴性对照，没有条带出现，说明实验不存在污染性，实验结果可靠（图12）。采用实时荧光PCR扩增方法检测诺卡氏菌是目前所采用的一种简单实用的诊断方法（图13）。

此外，寄生虫、立克次体，以及某些真菌和卵菌、分枝杆菌、鲑肾杆菌等感染后也可出现内脏结节，因此在对大口黑鲈诺卡氏菌病进行诊断时需慎重。

图11

图12

图13

【防治措施】

鰤诺卡氏菌细胞壁表面存在枝菌酸，会形成一层渗透屏障，保护细菌不受外来有毒化学物质的侵害。此外，鰤诺卡氏菌在鱼类巨噬细胞中具有很强的防吞噬体酸化能力，robl/LC7蛋白可通过参与细胞凋亡调控，有效地实现免疫逃避；加之鰤诺卡氏菌细胞壁较厚，即使被破坏，也可形成L形缺陷细胞壁而继续成活，在环境适合时可恢复典型的鰤诺卡氏菌形态，造成疾病复发。因此，对大口黑鲈诺卡氏菌病目前尚无绝对有效的治疗方法。对该病的防治应以预防为主，改善养殖环境和提高鱼体免疫力（图14）

主要预防措施是清除底泥，彻底清塘，改善水体生态环境。在养殖过程中，保持水质清洁，特别是梅雨季节，需经常换水，防止水体富营养化，每15d左右使用复合光合菌调节水质，并定期在饲料中添加丁酸梭菌、复合乳酸菌、芽孢杆菌、维生素C以及多维，以增强鱼体的抗病能力。在疾病流行季节定期用双癸基二甲基溴化铵溶液对水体进行消毒，每2~3d一次，连续2~3次。

由于大口黑鲈诺卡氏菌病病程进展较慢，持续时间长，一般在发病初期无症状或症状不明显，因此要及时观察鱼的状态，采取措施对疾病进行控制。发现病鱼要及时清除，防止疾病蔓延。疾病发生后可用三黄散（大黄、黄柏、黄芩、大青叶等，每千克体重0.5g，每天1次，连用4~6d），或氟苯尼考粉（以氟苯尼考计，每千克体重10~15 mg，每天1次，连用3~5 d），或硫酸新霉素粉（以新霉素计，每千克体重5 mg，每天1次，连用4～6 d），或恩诺沙星粉（以恩诺沙星计，每千克体重10~20mg，每天1次，连用5~7d），或盐酸多西环素粉（以多西环素计，每千克体重20mg，每天1次，连用3~5d）等拌饲投喂，同时用溴氯海因粉（以溴氯海因计，每立方米水体30~40mg，每天1次，连用2d），或三氯异氰豚酸粉（以有效氯计，每立方米水体90~135 mg，每2~3d1次，连用1～2次），或戊二醛溶液（以戊二醛计，每立方米水体40mg，每天1次，连用2～3次）等全池泼洒消毒。

图14

【用药指南】

使用坤源的复合碘溶液、灭毒威之类的产品外泼消毒、杀菌。使用中药制剂，如三黄散，收敛伤口。

1.复合碘溶液

因各类水产养殖中常见的细菌、病毒等微生物，在生理代谢与作用靶点方面存在可被碘制剂作用的共性，经大量水产养殖从业者反馈，该复合碘溶液杀菌消毒效果出众。经养殖场景实际应用跟踪，使用后养殖水体中有害微生物数量显著减少，大口黑鲈的摄食与生长状态改善明显。

2.坤源灭毒威

经众多水产从业者反馈，坤源灭毒威具有出色的杀灭效果。经养殖一线跟踪实验，使用后水体中有害微生物繁殖得到有效抑制，水生动物发病情况减少，其对各类细菌性、病毒性等病害的防治效果良好，能助力水产养殖动物保持健康生长状态。

3.三黄散

经众多水产养殖户反馈，拌饵投喂后，水产动物的细菌性败血症、烂鳃、肠炎、赤皮和肝胆综合症等发病情况得到有效改善，对水产动物健康养殖助力明显，具有良好的防治效果。

具体确诊和处理流程，请联系当地坤源经销商和坤源业务员。