导语

结果：

Sci Rep | 血小板 miRNA 作为特发性 REM 睡眠行为障碍进展为突触核蛋白病的早期生物标志物

人口统计和临床数据
患者的人口统计学和临床数据如表3 所示。IRBD 患者和 CTRL 的平均年龄相似。IRBD 组中的男性比 CTRL 组多。在采血时，29 例 IRBD 患者中有 20 例 （69.0%） 未患任何神经系统疾病 （IRBD-IRBD），而 9 例 （31.0%） 表型转化为 PD （IRBD-PD， n = 5） 或 DLB （IRBD-DLB， n = 4）。
血小板中的 MiRNA 表达
分析了 29 例 IRBD 患者和 20 例 CTRLs 中 9 种 miRNA （has-miR- 139 – 5p、hsa-miR- 142 – 3p、h-miR- 146a- 5p、h-miR-150 – 5p、h-miR-26b-5p、has-miR-128 – 3p、h-miR-136 – 3p、h-miR-409 – 3p、h-miR-191 – 5p）的表达。校正前的平均 Ct 和标准偏差值如表4 所示。其中，与 CTRL 相比，29 个 IRBD 血小板样本中的 hsa-miR-139 – 5p 和 hsa-miR-142 – 3p 显着减少（分别为 p = 0.010 和 p = 0.017），事后功效分析后的功效值分别为 0.861 和 0.981。与 CTRL 相比，IRBD 中的 Hsa-miR-191 – 5p 表达显著增加 （p = 0.023;功效值 = 0.813）。其他 6 个 miRNAs 的表达在 IRBD 和 CTRLs 之间没有显著差异。
IRBD 和对照组血小板中 hsa-miR-139 – 5p、hsa-miR-142 – 3p 和 hsa-miR-191 – 5p 表达水平的比较。通过 Wilcoxon-Mann-Whitney 检验获得的 P 值。
当 IRBD 组分为 IRBD-IRBD、IRBD-PD 和 IRBD-DLB 时，与 CTRLs 相比，hsa-miR- 139 – 5p 和 hsa-miR- 142 – 3p 的减少以及 hsa-miR- 191 – 5p 的增加仍然显著在 IRBD-IRBD 中。与 IRBD-IRBD 或对照相比，IRBD-PD 和 IRBD-DLB 的表达没有显著差异。
IRBD-IRBD、IRBD-PD 和 IRBD-DLB 亚组和对照之间血小板中 has-miR-139 – 5p、hsa-miR-142 – 3p 和 hsa-miR-191 – 5p 表达水平的比较。通过 Wilcoxon-Mann-Whitney 检验获得的 P 值。
MiRNA 表达与临床变量之间的相关性
然后，作者分析了三种显著失调的 miRNAs 的表达水平与表型转化前 IRBD 持续时间 （对于 IRBD-PD 和 IRBD-DLB） 或持续时间 （对于 IRBD-IRBD） 与 RBD 发病年龄之间的可能相关性。在分析了所有 29 名 IRBD 受试者后，发现血小板 miRNA 表达水平与 RBD 发病年龄（Pearson 相关系数 R 在 -0.16 和 -0.02 之间）或 RBD 持续时间（Pearson 相关系数 R 在 -0.29 和 -0.20 之间）之间没有相关性。然而，当对 IRBD-IRBD、IRBD-PD 和 IRBD-DLB 三组进行相关性分析时，发现 IRBD-PD 中 miRNA 表达水平与 RBD 发病年龄之间存在很强的负相关（图 3 A） 和表型转化前的 RBD 持续时间.
（A） RBD 开始时 miRNA 表达与年龄之间的相关性，以及 （B）表型转换前 RBD 持续时间。皮尔逊相关系数 （R） 显示在每个图表中。
因此，在大约 62 岁之前发生 PD 的病例以及在 RBD 的前 8 年内转化为 PD 的病例中，miRNA 表达较高. 由于样本量小，无法评估 Pearson 相关性的 p 值。
MiRNA 表达在性别之间没有显著差异。
MiRNA 相互作用组分析
然后，分析 has-miR- 142 – 3p 、 has-miR- 139 – 5p 和 hsa-miR- 191 – 5p 的相互作用组基因集。hsa-miR- 142 – 3p 相互作用组由 39 个具有显著 PPI 富集的基因组成 （p = < 0.0001）。搜索基因产物在血小板中是否存在，据报道有 15 种在 mRNA 或蛋白质水平表达25。这些通过 String 分析显示显着的 PPI 富集 （p = 0.0105）。 4 预测 9 个基因是细胞骨架的组成部分 （GO： 0005856， FRD： 0.0069），其中 3 个参与肌动蛋白聚合或解聚 （GO： 0008154， FRD： 0.0158），3 个参与 G13 信号通路 （WP524， FRD： 0.0027） （图 . 4 B）.
血小板中表达的蛋白质的 hsa-miR-142 – 3p 相互作用组 （A）。（B）位于细胞骨架中的蛋白质（蓝色），参与肌动蛋白聚合/去极化（红色）或 G13 信号转导（绿色）。
has-miR- 139 – 5p 相互作用组基因集也包含 39 个基因。其中，19 种在血小板中表达，String 分析显示非常显着的 PPI 富集 （p = 1.08e- 08）。然而，未发现与血小板功能相关的生物学过程或分子功能，并且 KEGG 通路与多种癌症类型相关。
hsa-miR- 191 – 5p 相互作用组基因集包含 19 个基因。8 个在血小板中表达，但未发现 PPI 富集 （p = 0.165），KEGG 通路也与癌症有关。
血小板中管家基因的建立
在最初测试的 7 个基因中，SNRPD 和 RDX 符合 HKG 定义的标准：（1） Shapiro 测试 p 值不显著（分别为 0.1039 和 0.3385），这意味着 Ct 值遵循正态分布（图 1）。 5 ）;（2） 比较 CTRLs 与 LBD 和 AD 的表达变化平均值和范围，以及评估两个基因的 LBD 与 AD 的表达变化平均值和范围在 0.75 和 1.25 之间，表明 CTRL 、 AD 和 LBD 组之间没有显著差异;（3） Ct 值之间的差异接近 0 （SNRPD-RDX：CTRL 与 AD 为 -0.18，CTRL 与 LBD 为 -0.18，AD 与 LBD 为 0）。此外，在执行 NormFinder 方法后，SNRPD 和 RDX 的 rho 值最低 （分别为 0.186 和 0.189）。
所有样品的SNRPD 和 RDX 基因表达的 Ct 值分布。每个条形表示对应于每个 Ct 值的患者数。包括所有三组的样本 （n = 30）。用 Shapiro 检验检验正态分布。
血小板中 hsa-miR-142 – 3p 调控基因的表达
基于 hsa-miR-142 – 3p 相互作用组分析，作者进一步分析了作为细胞骨架组成部分的四个基因和至少一个附加途径：ROCK2、RAC1、WASL 和 TWF1在所有 IRBD 患者和 31 个 CTRL 中。血小板 ROCK2、RAC1 和 TWF1 表达在 IRBD 和对照组之间没有差异，而 WASL 表达在 IRBD 中显着增加 （1.58 ± 0.70 vs. 1.08 ± 0.40 在 CTRLs 中，p = 0.008 和功效值 = 0.957;无花果。 6 此外，发现 has-miR-142 – 3p 与 WASL 表达之间存在显著的负相关，其中血小板 has-miR-142 – 3p 水平较低的患者表现出较高的 WASL 表达 （p = 0.001;无花果。 6 B）.
WASL 在血小板中的表达。（A） IRBD 和对照之间 WASL 表达水平的比较;通过 Wilcoxon-Mann-Whitney 检验获得的 p 值 （B） WASL 与 has-miR- 142 – 3p 表达之间的相关性。通过线性回归获得的 Pearson 相关系数和 p 值。显示了 Pearson 相关系数 （R） 和相应的 p 值。

总结

在 LBD 患者血小板中减少的 8 个 miRNA 中，hsa-miR-142 – 3p 和 hsa-miR-139 – 5p 在 IRBD 中也减少，表明在疾病进展中发挥作用。此外，受 hsa-miR-142 – 3p 调节的 WASL 表达在 IRBD 中增加，支持血小板功能在前驱突触核蛋白病早期受损的假设。如果在 IRBD 患者中发现 has-miR- 191 – 5p 过表达可能是表型转换的预测生物标志物，则需要进一步研究。