生殖免疫的核心：子宫内膜异位症和腺肌症的免疫炎症、生殖破坏、妊娠失败等相关病理生理（本长文共分三大部分）。

第一部分：一、低生育力（不孕，RIF反复种植失败，RPL反复流产等，妊娠失败与妊娠病理）的生殖免疫学相关评估（链接在文末目录）

第二部分：二、反复种植失败（RIF）与子宫内膜容受性评估（已发出文章链接在文末目录）
第三部分：三、子宫内膜异位症和腺肌症、肌瘤等相关免疫炎症、生殖破坏、妊娠失败等相关病理生理（部分已经文链接在文末目录）

本文为第三部分，第（三、175、138）篇（全文目录附文末），

这是发表在 Sci Immunol. 2021 Feb 19;6(56):eabb7800.的一篇Observational Study文章。

人类子宫自然杀伤细胞在子宫内膜再生和妊娠期间的持续分化

摘要 

免疫细胞分化对于组织特异性免疫反应的充分发生至关重要。在此，我们研究了人类子宫自然杀伤细胞（uNK 细胞）的分化情况。这些细胞存在于不断再生的组织中，并且是母胎界面的主要白细胞群。然而，它们在月经周期和妊娠期间的生理反应仍不清楚。通过表面蛋白质组和转录组分析以及使用人源化小鼠，我们在体外和体内确定了 uNK 细胞的分化途径，其依次获得杀伤细胞免疫球蛋白样受体和 CD39。uNK 细胞分化持续响应子宫内膜再生，并由白细胞介素 – 15 驱动。分化的 uNK 细胞表现出增殖能力降低以及免疫调节功能增强，包括增强的血管生成能力。通过研究人类子宫移植和同卵双胞胎，我们发现 uNK 细胞的生态位可以从循环中补充，并且受遗传控制。我们的研究共同揭示了人类子宫内自然杀伤细胞存在一条持续的分化途径，该途径与对局部组织再生和妊娠的深刻功能变化相耦合。

引言

淋巴细胞在环境信号的刺激下进行分化是一个已被充分描述且十分重要的过程，借此宿主能够对各种挑战作出反应。在人类中，不仅适应性淋巴细胞会经历这样的过程，外周血中的自然杀伤（NK）细胞也会受到调节性分化的控制（1-4）。越来越多的证据表明，适应性淋巴细胞在外周组织中会发生局部分化，并出现组织驻留记忆细胞（5, 6）。同样，非 NK 细胞的固有淋巴细胞（ILCs）也会对环境信号作出具有可塑性和分化性的反应（7, 8）。然而，关于组织微环境如何影响 NK 细胞分化的情况却知之甚少。

在次级淋巴组织和外周血中，人类自然杀伤（NK）细胞从 CD56bright 分化为更成熟的 CD56dim NK 细胞（9）。在外周血 CD56dim NK 细胞亚群中，进一步的成熟过程以 NKG2A 的丢失、杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIRs）和 CD57 的获得为标志，同时增殖能力降低，功能偏向于天然细胞毒性（3, 10）。在循环系统之外，NK 细胞在肝脏和子宫的淋巴细胞中富集（11）。子宫 NK（uNK）细胞是妊娠期蜕膜中数量最多的淋巴细胞，在调节滋养层细胞侵袭方面发挥着重要作用（12）。尽管 uNK 细胞在表型上更类似于外周血中未分化程度较高的 KIR−CD56bright NK 细胞，但 uNK 细胞中 KIR 的表达频率较高（13-15）。最近对母胎界面的单细胞转录组分析揭示了孕妇 uNK 细胞区室内的亚群异质性，包括鉴定出表达外核苷酸酶 CD39 的 uNK 细胞亚群（16-18）。此前已有研究表明，CD39 在小鼠和人类肝脏中的组织驻留自然杀伤细胞中表达（19, 20），并且在癌症中可能诱导自然杀伤细胞和其他淋巴细胞表达，从而导致免疫功能障碍（21, 22）。然而，子宫本身，尤其是其黏膜表面——子宫内膜，是一种在初潮、每次月经周期、怀孕以及最后在绝经时都会发生显著再生的组织。因此，目前尚不清楚通过表达 KIRs 和/或 CD39 的细胞亚群所揭示的子宫自然杀伤细胞亚群异质性（16）是否代表了局部分化过程，以及这种分化是否受到子宫内膜再生、怀孕和/或绝经的调节或与之相关。

在此，基于表面蛋白质组和转录组分析，我们提出了一种模型，即人类子宫内膜和蜕膜中存在未成熟自然杀伤细胞（uNK 细胞）的持续从头分化。这一过程可由 uNK 细胞上 KIR 和 CD39 的依次获得来表征，并与子宫内膜再生和蜕膜化相关，但在绝经后消失。uNK 细胞的分化是对白细胞介素 -15（IL-15）的响应，导致功能从促炎向免疫调节和增强血管生成能力转变。在生育期女性中，分化后的 KIR+ CD39+ uNK 细胞生态位可以从循环中得到补充，其大小受遗传控制。总之，这确定了在再生或妊娠子宫的局部环境中触发的 uNK 细胞内细胞分化过程。

（二、28、4）人子宫内膜间质细胞蜕膜化的调节因子

结果

表面蛋白质组分析揭示了 uNK 细胞的独特表型

作为筛选子宫自然杀伤（uNK）细胞区室中可能与细胞分化相关的异质性的初步步骤，我们对 uNK 细胞进行了表面蛋白质组筛选，并将其与常规循环自然杀伤（NK）细胞进行了比较。为此，我们对从循环、非妊娠育龄妇女的子宫内膜或蜕膜中分离出的 NK 细胞进行条形码标记，并用 NK 细胞特异性骨架进行染色，然后通过流式细胞术筛选 353 种表面蛋白的表达情况（图 1A）。在这 353 种表面蛋白中，有 309 种至少在一种 NK 细胞群中表达，122 种蛋白在任何亚群中的表达频率超过 10%，我们认为这一水平是进一步分析的合理阈值（图 1A 和 B 以及表 S1）。层次聚类揭示了所有 NK 细胞（无论其来源如何）共有的表面蛋白群以及不同 NK 细胞群特有的蛋白群（图 1B）。正如预期的那样，我们发现常规血液 NK 细胞高表达 CD57、CD16 和 DNAM-1，而 uNK 细胞则高频率表达 CD9 和 CD49a（图 1B 至 D 以及表 S1）。我们的分析还发现了子宫自然杀伤细胞（uNK 细胞）和循环自然杀伤细胞表面蛋白质组的先前未知差异。这包括 uNK 细胞表面 GITR、唾液酸 Lewis X 和 CD82 的高表达水平以及 Siglec-7 和 GPR56 的缺失（图 1B 至 D 和表 S1）。由于蜕膜样本在染色前经过了酶消化处理，而子宫内膜（月经血）和外周血单个核细胞（PBMCs）则未经过此处理，因此评估了组织消化对关键表型标志物表达的影响，发现其影响较小（图 S1A）。接下来，当比较来自非妊娠（子宫内膜）或妊娠（蜕膜）组织的 uNK 细胞时，我们总体上注意到差异较少（图 1B 和 E）。然而，在对 122 种表面蛋白表达进行主成分分析（PCA）时，常规自然杀伤细胞和来自蜕膜及子宫内膜的 uNK 细胞被分别聚类（图 1F）。

总之，这项表面蛋白质组筛查不仅证实了先前报道的常规自然杀伤细胞和 uNK 细胞的表型，还揭示了一些此前未被发现的差异。接下来，我们利用这些数据评估了 uNK 细胞内部的异质性与可能的分化之间的关系。

KIR 和 CD39 的表达勾勒出 uNK 细胞内初步的分化情况

传统的自然杀伤（NK）细胞分化包括获得杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）（3, 23）。因此，我们假设获得 KIR 也是子宫自然杀伤（uNK）细胞分化的一个关键步骤。在比较 KIR+ 与 KIR− uNK 细胞的表面蛋白质组时（从这里开始，KIR 表达指的是 KIR2DL1/L2/L3/S1/S2 的联合表达），我们注意到存在显著差异，其中包括 KIR+ uNK 细胞上 CD39 的表达（图 2A）。与单细胞 RNA 数据一致（16），CD39 表达几乎仅限于来自蜕膜的 KIR+ uNK 细胞（图 2B）。与其他组织相比，KIR 和 CD39 的共表达似乎仅限于子宫内的 NK 细胞，因为常规循环 NK 细胞上不存在 CD39，尽管在肝脏和扁桃体 NK 细胞上也发现了 CD39，但这些细胞上 CD39 主要表达于 KIR− NK 细胞群体（图 S1，B 至 E）。当重新评估 uNK 细胞表面蛋白质组时，也考虑了 CD39 的表达情况，结果表明，不仅 KIR 的表达与表面蛋白的协调变化有关，而且同时对 KIR 和 CD39 进行分层分析，还会使表面蛋白质组进一步趋于一致（图 2C 和图 S1E）。从 KIR− CD39− 到 KIR+ CD39− 再到 KIR+ CD39+ ，显著的变化包括 CXCR1、GITR、CD71、CXCR7 和 CD82 的上调以及 CD11c、CD27、CD44、CD49d、CD69 和 Siglec-7 的下调（图 2C 和图 S1F）。在更详细地研究 KIR+ CD39− 和 KIR+ CD39+ uNK 细胞中 KIR 表达模式时，发现 KIR+ CD39+ uNK 细胞更常共表达多种 KIR，并且这些 KIR 的表达水平更高（图 2D），这两种特征此前都与常规 NK 细胞的分化有关（3, 24）。最后，KIR+ CD39+ uNK 细胞表现出线粒体质量增加和膜电位升高（图 2E）。综上所述，这表明 KIR 和 CD39 的表达可作为 uNK 细胞分化的标志。

多组学证实了假设的未成熟自然杀伤细胞分化
为了描述不同表达 KIR 和 CD39 的 uNK 细胞组合之间的差异，我们首先对从蜕膜中通过荧光激活细胞分选（FACS）分选出来的 KIR− CD39− 、KIR+ CD39− 和 KIR+ CD39+ uNK 细胞进行了批量 RNA 测序（RNA-seq）。这三个群体沿着与表面蛋白质组分析中所揭示的相似的轨迹被单独聚类（图 2F 和图 S2A），并且重现了表面蛋白质组和线粒体染色的结果，例如 CXCR4 的丢失、CD44 的丢失、LILRB1 的获得以及线粒体定位过程的富集（图 2G；图 S2，B 至 D；表 S2）。接下来，我们对三个蜕膜样本进行了飞行时间质谱细胞术（CyTOF），以同时评估 32 种 NK 细胞标志物的表达，包括 KIR 和 CD39。在这些数据的均匀流形近似和投影（UMAP）分析中，KIR+ CD39+ uNK 细胞被单独聚类，并且之前从表面蛋白质组筛选和转录组中获得的结果得到了证实，例如 LILRB1 和 KIR 的表达以及 CD27 和 CD11c 的丢失（图 2H 和图 S3）。此外，我们对 CyTOF 数据进行了 Wishbone 轨迹分析，这是一种用于识别发育轨迹的方法（25），KIR 和 CD39 出现在轨迹的末端（图 2H）。最后，我们使用先前发表的单细胞 RNA 测序数据计算了分化轨迹，以进一步验证我们的发现（16）。令人欣慰的是，对这些数据进行的无监督伪时间轨迹分析重现了我们的发现，并且我们的批量 RNA 测序特征与单细胞数据之间具有高度一致性（图 2，I 和 J 以及图 S4）。总之，这些结果表明 KIR 和 CD39 沿着一个推测的分化轨迹界定了表型和转录上不同的 uNK 细胞亚群。
uNK 细胞持续局部分化的证据
在每个月经周期中，子宫内膜都会经历组织再生，并开始蜕膜化以期迎接即将到来的妊娠。因此，我们假设如果 KIR 和 CD39 的差异表达标志着 uNK 细胞分化过程中的中间步骤，那么在子宫内膜组织再生过程中，表达这些标志物的 uNK 细胞亚群之间的动态变化应该会有所体现。为了验证这一观点，我们通过评估 Ki-67 的表达情况，对月经周期早期（第 7 天）和晚期（第 20 天）的子宫内膜活检样本中的免疫细胞增殖情况进行了研究。在所有主要的免疫细胞群体中，uNK 细胞在子宫内膜再生期间表现出最强的增殖反应，在月经周期的第 20 天，多达 60% 的 uNK 细胞表达 Ki-67（图 3A 和 B 以及图 S5A）。相比之下，子宫内膜中发现的大多数其他免疫细胞群，包括常规的 CD16+ NK 细胞，其增殖情况并未发生改变（图 3A 和 B 以及图 S5A）。细胞的增殖是局部事件，因为在外周血 NK 细胞或其他循环免疫细胞中未检测到 Ki-67 表达的差异（图 S5B）。
图 1. 子宫自然杀伤细胞表面蛋白质组分析。（A）表面蛋白质组流式细胞术分析的示意图工作流程。简而言之，从不同组织和供体中通过 MACS 纯化自然杀伤细胞，进行条形码标记，混合，然后使用 LEGENDScreen 试剂盒（BioLegend）用藻红蛋白（PE）标记的抗体对表面蛋白质组表达进行染色，最后进行个体表达分析。（B）显示表达频率的层次聚类热图，仅包含在至少 10%的自然杀伤细胞上表达的标记（在总共分析的 353 个标记中，有 122 个）。（C 和 D）代表性直方图比较外周血（PB，阴影）、月经血（MB，黑色线）和蜕膜来源的自然杀伤细胞（Dec，虚线）或（E）MB 和 Dec 与同型对照（阴影）。（F）122 个在自然杀伤细胞亚群上表达的标记的主成分分析，样本来源由颜色图例指示。
接下来，我们评估了月经周期和妊娠期间表达 KIR 和 CD39 的 uNK 细胞的比例。通过组织活检的免疫荧光显微镜检查以及流式细胞术数据的 UMAP 分析，对子宫内膜中存在的免疫细胞进行了广泛观察，在周期性子宫内膜和蜕膜中均能识别出 CD39+ uNK 细胞（图 S6）。此外，与 CD39 联合发挥作用的 CD73 并未在 uNK 细胞上表达，但在蜕膜的基质和上皮细胞中存在，并且在子宫内膜中的表达水平更高（图 S7）。更详细地说，KIR− CD39− uNK 细胞在月经周期的早期和中期更为常见，而 KIR+ CD39− 和 KIR+ CD39+ uNK 细胞亚群的大小在月经周期末期增加，并在妊娠期间保持在相似的较高水平（图 3C 和 D）。不同供体的 uNK 细胞亚群的相对丰度差异很大，但在所有供体中均观察到在周期末期 KIR+ CD39− 和/或 KIR+ CD39+ uNK 细胞频率增加的相同模式（图 3，C 和 D）。绝经后，性激素水平降低，子宫内膜停止再生。在绝经后子宫内膜中，绝大多数 uNK 细胞呈现 KIR− CD39− 表型，几乎找不到 KIR+ CD39+ uNK 细胞（图 3，C 和 D）。
图 2.uNK 细胞亚群异质性的表征。（A）KIR+ 和 KIR− 胎盘蜕膜 uNK 细胞亚群的表面蛋白质组。在分析的 353 个标志物中，仅显示了差异超过 10% 的标志物。（B）通过 CD39 和 KIR 表达鉴定的主要 uNK 细胞群的代表性图谱以及外周血（n = 9）和蜕膜（n = 9）中 KIR+ 和 KIR− 细胞中 CD39 表达的总结。（C）蜕膜中 KIR− CD39−、KIR+ CD39− 和 KIR+ CD39+ uNK 细胞亚群的表面蛋白质组。显示的是 353 个分析标志物中差异最大的 25 个标志物的平均表达。（D）蜕膜中指定 uNK 细胞亚群表达 1 至 5 个 KIR 的频率（均值 ± 标准差；上图）以及表达水平（中位荧光强度，MFI；下图）（n = 7）。（E）蜕膜样本中指定亚群的线粒体质量（MitoTracker Green；左图）和膜电位（MitoTracker Red CMXRos；右图）的流式细胞术分析（n = 8）。（F 和 G）蜕膜中指定 uNK 细胞亚群的总 RNA 测序的主成分分析（F）和差异表达基因（G）（n = 4）。对于差异表达基因（DEGs），所选的截断值为：log2 倍数变化 > 1.5，校正 P 值 < 0.05，计算出的变异系数平方（CV2）≤ 1.95 以及平均读取计数 > 10。另见图 S2 中补充的总体 RNA 测序数据。（H）三个蜕膜样本的 CyTOF 数据的 UMAP 维度降低（左侧），这些样本用 32 种 NK 细胞标记物进行染色。基于所指示的标记物的这些数据的 Wishbone 轨迹（右侧）。另见图 S3 中详细的 CyTOF 分析。（I）蜕膜中 uNK 细胞的单细胞 RNA 测序数据的扩散图和 Slingshot 假时间轨迹推断（左侧）。轨迹由我们使用 Vento-Tormo 等人（16）生成的可用单细胞数据计算得出。（J）沿假时间轨迹的指定基因表达（另见图 S4）。（B 和 D）对于配对样本，显著性通过 Wilcoxon 检验计算；对于未配对样本，通过 Mann-Whitney 检验计算，（E）或者通过方差分析（ANOVA）或 Friedman 检验后进行 Tukey 检验或 Dunn 检验分别计算。*P < 0.05 和 **P < 0.01。
最后，由于蜕膜中 KIR+CD39+uNK 细胞群的大小在个体间差异较大，范围为 4%至 64%，我们通过分析单卵双胞胎的 uNK 细胞来确定遗传因素与环境因素对 uNK 细胞分化的影响。结果发现一致性较高，表明 uNK 细胞的分化受遗传因素而非环境因素的调控（图 3E）。为了进一步探究这种供体间的差异，我们将月经血中 KIR+CD39+uNK 细胞的频率与体重指数（BMI）、年龄、报告的月经周期长度以及蜕膜中这些细胞的频率与妊娠期进行相关性分析（图 S8A 和 B）。在这些因素中，只有月经周期长度与 KIR+CD39+uNK 细胞的频率呈正相关（图 S8A）。
图 3. 子宫自然杀伤细胞局部分化的证据。（A）来自同一供体在月经周期第 7 天或第 20 天的外周血自然杀伤细胞（上图，定义为 CD56dimCD16+ 自然杀伤细胞）或子宫内膜活检中的子宫自然杀伤细胞（下图，定义为 CD56brightNKG2A+ CD16− CD57− 自然杀伤细胞）中 Ki-67 表达的代表性图谱。（B）在月经周期第 7 天和第 20 天之间，所指示免疫细胞亚群中 Ki-67 表达的个体差异（均值 ± 标准误，n = 9）。（C）在所指示组织和时间点中，总自然杀伤细胞中 CD39 与 KIR 表达的代表性图谱。（D）来自外周血（n = 11）、子宫内膜组织[第 7 天（n = 6）和第 20 天（n = 9）]、月经血（n = 11）、蜕膜（n = 17）和绝经后子宫内膜（n = 4）的子宫自然杀伤细胞亚群分布（CD56brightNKG2A+ CD16− CD57−）的汇总数据。连接线表示配对样本。（E）单卵双胞胎中月经血中所指示子宫自然杀伤细胞亚群频率的相关性图谱，比较双胞胎 A 与双胞胎 B 的百分比（n = 5 对）。R2 由线性回归模型计算得出。（F）描述子宫移植组织实验的示意图。（G）直方图显示了来自供体或受体的外周血 NK 细胞以及移植后从子宫内膜中回收的 KIR+ CD39+ uNK 细胞的供体或受体特异性 HLA 表达情况，共涉及四位供体。对于匹配样本采用 Wilcoxon 检验，对于不匹配且非正态分布的样本采用 MannWhitney 检验，对于正态分布的样本采用未配对/配对 t 检验。*P < 0.05，**P < 0.01，***P < 0.001，****P < 0.0001。
总之，这些数据表明，子宫自然杀伤细胞是子宫内膜再生过程中的主要反应细胞。我们进一步证明，KIR+ CD39+ 子宫自然杀伤细胞在月经周期的后期和妊娠期出现，KIR+ CD39+ 子宫自然杀伤细胞群体的大小在一定程度上受遗传控制，并且子宫自然杀伤细胞向 KIR+ CD39+ 亚群的局部分化依赖于性激素。
KIR+ CD39+ uNK 细胞从循环中得到补充
小鼠的共生实验表明，驻留的鼠类子宫自然杀伤（uNK）细胞不会再循环（26）。与此一致的是，人类的 uNK 细胞表达高水平的组织驻留标志物，如 CD49a（27）和 CD69（28）（图 1B）。这表明，尽管子宫内膜每月都会再生并在月经期间脱落，但人类的 uNK 细胞是子宫内的永久居民。为了验证这一假设，我们利用了四名接受子宫移植并成功怀孕的女性的子宫内膜和外周血样本（表 S3）。子宫移植是一种极为罕见的临床手术，迄今为止全球范围内此类手术数量不足 30 例（29），该手术跨越人类白细胞抗原（HLA）屏障，通过针对供体或受体特异性 HLA 分子的染色，可以确定细胞的起源（图 3F）。供体和受体的外周血 NK 细胞基于受体或供体特异性 HLA 表达而明显区分开来（图 3G）。移植子宫中几乎所有的 KIR+ CD39+ uNK 细胞均为受体来源。同样，KIR+ CD39− 和 KIR− CD39− 的 uNK 细胞也源自受体（图 S8C）。这表明，随着时间的推移，uNK 细胞会从循环中得到补充，尽管 uNK 细胞表达组织驻留标志物，但它们可能只是暂时驻留在组织中的细胞群。
IL – 15 介导的增殖在体外和体内驱动未成熟自然杀伤细胞分化
由于 KIR+ CD39+ uNK 细胞数量的增加发生在月经中期 uNK 细胞增殖爆发之后，我们推测 uNK 细胞的分化与细胞增殖有关。在这方面，已知在排卵后达到峰值的孕酮会促进子宫内膜基质局部产生 IL-15（30-32）。因此，我们接下来研究了 IL-15 诱导的增殖与 KIR+ CD39+ uNK 细胞出现之间的联系。首先，对 FACS 分选的 KIR− CD39− 、KIR+ CD39− 和 KIR+ CD39+ uNK 细胞用 IL-15 刺激 7 天，并评估其增殖能力（图 4A）。KIR− CD39− uNK 细胞增殖能力很强（图 4B 和 C）。然而，在表达 KIR 的亚群中，最后表达 CD39 的亚群，其增殖能力依次丧失（图 4B 和 C）。将白细胞介素 -15 刺激与子宫自然杀伤细胞（uNK 细胞）亚群在子宫内膜基质细胞（ESCs）上的培养相结合，进一步增强了 KIR− CD39− uNK 细胞的增殖能力，但对其他 uNK 细胞亚群没有影响，并且使用抑制剂 ARL67156（ARL）阻断 CD39 对 IL-15 或 IL-15 与 ESC 联合刺激下 KIR+ CD39+ uNK 细胞增殖能力的影响很小（图 S8，D 和 E）。接下来，我们研究了在白细胞介素 -15 刺激下每个亚群中 KIR 和 CD39 上调的潜力。尽管在体外仅观察到 KIR 的中度上调，但 CD39 在 KIR− CD39− 和 KIR+ CD39− uNK 细胞亚群中均被强烈诱导（图 4，D 和 E）。CD39 的诱导主要发生在先前已分裂的细胞中（图 4，D 和 E）。尽管 IL-15 与 ESC 联合刺激增强了 KIR− CD39− uNK 细胞的增殖能力，但在实验中加入 ESC 时，CD39 的诱导没有差异（图 S8F）。
我们已证明 CD39 可在体外通过 IL-15 诱导 uNK 细胞上调表达，接下来我们使用一种人源化小鼠模型“MISTRG”在体内评估这一分化途径，该模型通过基因敲入表达人类细胞因子（33-35）。MISTRG 小鼠体内缺乏内源性小鼠 NK 细胞，但支持人类 NK 细胞的发育和分化（34, 36）。移植了人类 CD34+造血干细胞和祖细胞的 MISTRG 小鼠在小鼠子宫内存在人类 NK 细胞，其表型类似于 uNK 细胞，包括 NKG2A 的高表达以及可明显检测到的 KIR 表达（图 S8，G 和 H）。然而，很少能识别出 KIR+ CD39+ NK 细胞（图 S8，G 和 H），这可能是由于小鼠具有发情周期而非月经周期，导致局部产生的 IL-15 较少。因此，我们接下来通过流式细胞术分选成熟的人类 uNK 细胞亚群，并将其静脉内移植到 MISTRG 小鼠体内，同时在细胞移植时腹腔注射 IL-15/IL-15Rα 复合物（图 4，A 和 F 至 H）。7 天后处死小鼠，并分析 uNK 细胞分化的迹象。在子宫内未检测到转移的细胞。相反，从脾脏和肝脏中均能回收到转移的 KIR− CD39− uNK 细胞，其中一部分细胞的 KIR 和 CD39 表达上调（图 4，G 和 H）。同样，转移的 KIR+ CD39− uNK 细胞在第 7 天也显示出 CD39 表达上调的迹象（图 4，G 和 H）。由于过继转移后的细胞回收率较低，因此根据同一实验中染色的对照蜕膜样本设置门限（图 S8I）。总之，我们在此表明，IL-15 驱动的增殖促使 uNK 细胞分化，包括 CD39 的获得。
功能偏向于减少促炎细胞因子和增强血管生成能力与uNK分化相关联
由于许多免疫细胞发育途径会导致功能发生显著改变，我们接下来评估了 uNK 细胞功能与分化之间的关系。对 uNK 细胞亚群的总 RNA 测序数据进行基因集富集分析（GSEA）显示，分化程度较低的 KIR− CD39− uNK 细胞富含促炎和激活过程，而 KIR+ CD39+ uNK 细胞则富含负调节过程（图 5A 和 B）。为了验证这种可能的功能二分法，通过流式细胞术分选的 KIR− CD39−、KIR+ CD39− 和 KIR+ CD39+ uNK 细胞分别用佛波酯 12-肉豆蔻酸 13-乙酸酯（PMA）/离子霉素或 IL-12/15/18 的组合进行刺激，并使用邻近延伸分析（PEA）同时定量测定上清液中的 92 种可溶性因子（表 S4）。在任何一种刺激下，与 KIR− CD39− 和 KIR+ CD39− 细胞相比，KIR+ CD39+ uNK 细胞产生的干扰素-γ（IFN-γ）、TNFSF14（LIGHT）、CCL3 和 CCL4 显著减少（图 5C 至 E 和图 S9A 至 D）。相反，KIR+ CD39+ uNK 细胞释放的颗粒酶 A、半乳凝素-1 和半乳凝素-9 等物质增加（图 5C 至 E 和图 S9）。从整体和单细胞 RNA 测序数据来看，我们还注意到，在未受刺激阶段，KIR+ CD39+ uNK 细胞的颗粒酶 A、半乳凝素 -1 和半乳凝素 -9 转录本水平显著更高（图 2G 和图 S10A）。在对所有三个群体的反应进行同时比较时，大多数观察到的差异要么存在于 KIR− CD39− 细胞中，要么存在于 KIR+ CD39+ 细胞中，很少有差异能明确归因于中间的 KIR+ CD39− uNK 细胞亚群（图 5F 和图 S9E）。最后，我们使用传统的流式细胞术验证了所确定的功能差异。在 PMA/离子霉素刺激后，KIR+ CD39+ uNK 细胞产生的 IFN-γ、CCL4、肿瘤坏死因子（TNF）和粒细胞 – 巨噬细胞集落刺激因子较少（图 5G 和图 S10B）。相反，该亚群表现出增强的脱颗粒作用，并且穿孔素和颗粒酶的表达水平更高（图 5G 和图 S10B）。此前已发现外周血 NK 细胞分化过程中功能偏向于减少促炎细胞因子的产生与 PLZF 的下调有关（37）。KIR+ CD39+ uNK 细胞的 PLZF 表达水平低于 KIR− CD39− uNK 细胞，但 Eomes 的表达水平高于 KIR− CD39− uNK 细胞（图 S10C）。
接下来，我们评估了子宫自然杀伤（uNK）细胞亚群在调节 T 细胞反应以及与内皮细胞相互作用方面的免疫调节特性。腺苷是 CD39/CD73 途径的最终产物，其能显著抑制子宫 CD8 T 细胞 IFN-γ 和 TNF 的生成（图 S10D），但 uNK 细胞亚群对 T 细胞功能或增殖没有可测量的影响（图 S10，D 至 F）。此外，我们采用了一种广泛使用的体外血管生成模型——网络形成实验，来测定 uNK 细胞亚群的血管生成能力。将先前经 IL-12/15/18 刺激的 uNK 细胞亚群的上清液加入内皮细胞（人脐静脉内皮细胞，HUVECs）中，观察到血管生成能力依次增强。具体而言，KIR− CD39− 细胞亚群的上清液几乎无法诱导网络形成，而 KIR+ CD39+ uNK 细胞亚群的上清液则成功诱导了网络形成，且总管长度显著增加（图 5，H 和 I，以及图 S10F）。最后，单细胞 RNA 测序数据进一步表明 KIR+ CD39+ uNK 细胞在血管生成中发挥作用，因为与 uNK 细胞的其他亚群相比，KIR+ CD39+ uNK 细胞中基因本体论（GO）术语“血管生成”显著富集（图 5J）。总之，这些结果表明 uNK 细胞的分化与功能显著偏离促炎性而转向增强血管生成能力相关。
图 4.IL-15 介导的增殖驱动 uNK 细胞分化。（A）功能实验的工作流程。从蜕膜中分选 uNK 细胞亚群后，细胞要么在体外用 IL-15（10 ng/ml）刺激以评估增殖和分化，要么在第 0 天和第 5 天被过继转移到用 IL-15/IL-15R-Fc 替代的 MISTRG 小鼠体内。（B 和 C）在 IL-15 刺激 7 天后，各指定亚群中 CFSE 或 CTV 稀释的代表性直方图（B）和汇总数据 [n = 11，（C）]。ctrl，对照。（D）在 IL-15 刺激 7 天后，各指定亚群中 CTV 稀释与 CD39 表达的代表性散点图。（E）IL-15 刺激 7 天后各指定亚群中 CD39 表达的汇总（n = 11）。（F）体内实验示意图及第 7 天时人 CD45+ 细胞的代表性散点图。（G）注射前和第 7 天时各 uNK 细胞亚群中 KIR 和 CD39 表达的代表性散点图。（H）三个独立实验的汇总，每输入的 uNK 细胞亚群共 n = 4 只小鼠，显示第 7 天肝脏和脾脏中 KIR 和 CD39 的表达。（C 和 E）采用弗里德曼检验（Friedman’s test）对匹配组之间的差异进行显著性检验，随后进行邓恩检验（Dunn’s test）。**P < 0.01 和 ***P < 0.001。
讨论 
免疫细胞对环境信号作出反应而分化的过程对于免疫系统的正常运作至关重要。尽管人们已明确外周血中的常规自然杀伤（NK）细胞会分化，但对于外周组织中的 NK 细胞是否以及如何分化却知之甚少。在此，我们提出一种模型，即子宫自然杀伤（uNK）细胞在子宫内膜中对组织再生作出反应而发生局部分化（图 S11）。
作为出发点，我们采用表面蛋白质组筛选方法，绘制了子宫自然杀伤（uNK）细胞内的异质性图谱。基于表面蛋白质组以及整体和单细胞 RNA 测序分析，发现 uNK 细胞沿着一个假设的分化轨迹依次获得 KIR 和 CD39。我们所鉴定的 uNK 细胞亚群与先前使用单细胞 RNA 测序描述的群体有重叠（16）。然而，尽管那项先前的研究代表了某一时间点的快照，我们试图提供体内是否发生分化的确切机制证据。子宫内膜是一种反复再生的组织，由基底层和功能层组成。后者在月经周期中会增厚，除非怀孕，否则会在月经期间脱落。子宫内膜在月经周期和怀孕期间会对生殖激素作出反应。uNK 细胞在此处高度丰富，其功能与妊娠并发症有关（12, 38-40）。KIR− CD39− uNK 细胞在月经周期早期占主导地位，但在周期后期和孕妇的蜕膜中则较少见。相反，KIR+ CD39− 和最后的 KIR+ CD39+ uNK 细胞在月经周期末期变得更为常见，且 KIR+ CD39+ uNK 细胞在妊娠早期蜕膜中仍保持在相同的较高水平。在月经周期末期和妊娠早期蜕膜中观察到 uNK 细胞亚群频率存在相当大的异质性。然而，作为子宫内膜再生过程中持续的 uNK 细胞分化以及最终获得 KIR 和 CD39 的进一步证据，在绝经后子宫内膜中，几乎检测不到 CD39+ 的 uNK 细胞，且 KIR+ 的 uNK 细胞也很少。
将我们在 uNK 细胞中观察到的动态变化与月经周期中生理激素变化相结合，一个合理的联系是黄体酮诱导的子宫内膜基质细胞（ESCs）在每次排卵后开始产生白细胞介素 – 15（IL – 15）（30 – 32）。在所有主要的子宫内膜免疫细胞群中，uNK 细胞在排卵后的周期后期显示出最高的增殖水平。在体外，除了 IL – 15 外，ESCs 还能增强 KIR – CD39 – uNK 细胞的增殖，但不能增强更分化 uNK 细胞亚群的增殖。此外，KIR – CD39 – uNK 细胞在体外和人源化小鼠体内对 IL – 15 刺激作出反应，CD39 表达上调。对于体内实验，由于过继转移后回收的 NK 细胞数量较少，我们无法纳入诱导 CD39 和 KIR 表达的内部阴性对照染色。相反，使用了外部对照，即平行染色的蜕膜样本，以指导分析中设置门限。接下来，我们更详细地研究了体外 CD39 的上调情况，并注意到这仅限于最近分裂的细胞。随着 KIR 的获得以及最后 CD39 的获得，uNK 细胞也依次失去了增殖能力。似乎 CD39 在这种增殖能力的丧失中没有内在作用。这种更分化细胞增殖能力的降低类似于外周血中终末分化 CD57+ KIR+ NK 细胞的情况（3, 41）。
子宫内膜每月的脱落与再生是人类生殖生理学中独有的特征，在小鼠身上不存在，这导致了组织的持续更新以及局部驻留免疫细胞的不断更替。然而，目前尚不清楚每月的免疫再生是源自子宫内膜基底层中留存的局部前体细胞，还是通过血液循环从骨髓中主动招募细胞实现的。现有数据支持这两种观点，因为外周血中的自然杀伤细胞在暴露于转化生长因子-β后可获得子宫自然杀伤细胞的表型（42-44），并且在子宫内膜中也已鉴定出子宫自然杀伤细胞的前体细胞（45）。子宫自然杀伤细胞表达组织驻留标志物（27, 28），并且小鼠的连体研究也表明子宫自然杀伤细胞是非循环的（26）。此前，人类跨越人类白细胞抗原屏障的实体器官移植已被用于为肺和肠道中 T 细胞的长期组织驻留提供正式证据（46, 47）。与此相反，通过使用人类子宫移植作为模型，我们表明，所有 uNK 细胞的亚群都可以由新子宫宿主中的受体细胞进行补充。综合来看，这表明了一种模型，即 uNK 细胞是短暂的组织驻留细胞，基于它们表达组织驻留标记物以及来自小鼠联体实验的数据。然而，由于驻留细胞会随着月经周期反复脱落，然后在子宫内膜再生时再次分化，uNK 细胞亚群会随着时间的推移由具有 KIR− CD39− 表型的循环细胞进入子宫进行补充。
图 5.在未成熟自然杀伤（uNK）细胞分化过程中，功能偏向于减少γ干扰素（IFN-γ）的产生。（A）使用GOrilla工具对指定uNK细胞亚群进行基因集富集分析（GSEA）后，所选的最显著富集通路，*表示FDR<0.05。（B）将指定亚群与分子特征数据库中的标志性炎症反应基因集进行比较后的GSEA分析（另见“批量RNA测序分析”部分）。（C）使用PEA（n = 7）测量指定亚群在PMA/离子霉素刺激后释放的代表性因子。（D和E）在PMA/离子霉素（D）或IL-12/15/18（E）刺激后，PEA分析中指定uNK细胞亚群释放因子的10个最大差异的汇总数据（中位数及范围，n = 7）；差异针对每个供体分别计算。（F）PMA/离子霉素处理后的PEA分析结果，显示的是特定uNK细胞亚群（在右上角突出显示）与其他两个亚群的差异。红色点表示与两个其他组相比有显著差异，橙色点表示与一个其他组相比有显著差异。（G）PMA/离子霉素刺激后uNK细胞的流式细胞术分析。展示了来自9个样本的代表性图谱和汇总数据；显示了IFN-γ、CCL4和CD107a的频率以及穿孔素的平均荧光强度（MFI）。异常值以叉号标记。（H）将来自两个供体的经IL-12/15/18刺激的uNK细胞亚群上清液与人脐静脉内皮细胞（HUVECs）共孵育5小时后内皮细胞网络形成测定的代表性图片（总n=6，比例尺200μm）。底部一行显示对照（白色条，500μm），包括阴性对照培养基（EGM-2培养基）、测定培养基（用于生成uNK细胞上清液的CellGenix培养基）和阳性对照[EGM-2培养基加VEGF（15ng/ml）]。（I）对（H）中代表性数据的定量，显示HUVECs的总段长和分支间隔（n=6）。（J）对Vento-Tormo等人（16）公开的单细胞RNA测序数据中uNK细胞与促血管生成通路关系的分析。展示了GO术语“GO:0001525血管生成”与伪时间轨迹的相关性（左图；另见图 2 中的 I 和 J）或以小提琴图按 uNK 细胞亚群分组（右图）。数据以每个细胞的平均值表示，相关性按斯皮尔曼等级相关计算。显著性分别通过威尔科克森检验或配对 t 检验（D 和 E）或方差分析或弗里德曼检验后进行图基检验或邓恩检验（C、G、I 和 J）计算得出。*P < 0.05，**P < 0.01，***P < 0.001。
我们还注意到，不同个体的终末期 uNK 细胞群大小差异很大，范围在 4% 至 64% 之间。对于来自子宫内膜的 uNK 细胞，KIR+ CD39+ 细胞的频率与月经周期长度呈正相关，而对于来自蜕膜的 uNK 细胞，其与妊娠期则无明显关联。通过对同卵双胞胎的 uNK 细胞进行研究，我们的数据表明 uNK 细胞的分化受遗传控制，因为双胞胎的终末期 uNK 细胞群大小相似。这与先前的研究结果一致，即 CD39 表达细胞群具有很强的遗传性（48）。因此，可以合理推测，这种个体间的差异在一定程度上与遗传易感性有关，而且月经周期较长的女性其 uNK 细胞分化可能也会增强。然而，这种个体间差异的确切机制应在未来的研究中加以探究，不仅要在健康女性中研究，还要在子宫病理状况和妊娠并发症方面进行考察。酶消化组织法已被认为是研究组织驻留细胞时的一个干扰因素。因此，这可能在我们的表面蛋白质组筛选中引入了潜在的偏差。然而，月经血来源的 uNK 细胞的获取方式与外周血单个核细胞（PBMCs）相同（它们未经过酶处理），并且在额外的实验中，我们观察到未经处理和经过酶处理的样本在关键 uNK 细胞表型标志物的表达上没有差异。最后，我们在此处鉴定为 uNK 细胞差异表达的新标志物的其他表面蛋白（例如 GITR 和 CD82）应进一步评估。
免疫细胞分化的一个重要特征是功能适应。在此，我们提供了证据表明，分化程度较低的 KIR− CD39− uNK 细胞构成了一种更具促炎性的 uNK 细胞亚群，能够产生 IFN-γ、CCL3、CCL4 和 TNF。随着 KIR 的获得，这些功能会减弱，而当细胞最终获得 CD39 时，它们则会获得产生免疫调节因子（如半乳糖凝集素-1 和半乳糖凝集素-9）的能力。IFN-γ 被认为对小鼠生殖过程中的螺旋动脉形成至关重要（49, 50）。由于在月经周期早期直至排卵期间，产生 IFN-γ 的 KIR− CD39− uNK 细胞更为丰富，因此在周期早期拥有高水平的这些细胞可能具有生理作用，有助于优化螺旋动脉的形成，并为子宫内膜的着床做好准备。与此相反，KIR+ CD39+ uNK 细胞所表现出的功能则与免疫耐受和增强的血管生成能力相关联。半乳糖凝集素 -1 可诱导耐受性树突状细胞和调节性 T 细胞（Tregs）（51），Tim-3 配体半乳糖凝集素 -9 负向调节 TH1 免疫反应（52），半乳糖凝集素 -1 和半乳糖凝集素 -9 均与血管生成有关（53）。因此，在早期妊娠期间，产生半乳糖凝集素 -1 和半乳糖凝集素 -9 的 KIR+ CD39+ uNK 细胞可能对调节胎盘和蜕膜的胎母耐受性及血管化至关重要。在月经周期排卵后可能受精的晚期以及妊娠早期蜕膜中，这种 uNK 细胞群更为普遍。通过血管生成的体外模型，我们发现与 KIR− CD39− uNK 细胞相比，KIR+ CD39+ uNK 细胞的上清液能诱导血管生成芽的生长和发育良好的内皮网络的形成。单细胞 RNA 测序分析的结果进一步证实了这一发现，其中 KIR+ CD39+ uNK 细胞中“血管生成”的 GO 术语得到了丰富。这种增强的血管生成能力在未来的妊娠疾病研究中应予以关注。
除了产生半乳糖凝集素外，KIR+ CD39+ uNK 细胞或许还能通过 CD39 直接调节局部免疫反应。已知 CD39 由调节性 T 细胞和肿瘤相关巨噬细胞表达，据推测其通过将三磷酸腺苷分解为游离腺苷来介导免疫抑制功能（17, 18），目前针对 CD39 酶活性的抑制性抗体已在癌症临床试验中进行测试（54）。尽管我们能够证明腺苷在体外能强烈抑制子宫内膜 CD8 T 细胞，但我们未能证实 KIR+ CD39+ uNK 细胞在与这类 CD8 T 细胞反应中的直接免疫调节作用。这可能是因为主要是在基质和上皮细胞中观察到 CD73 的高表达，而 CD73 是 CD39/CD73 途径中产生腺苷所需的第二种酶（55）。因此，表达 CD39 的 uNK 细胞在体内仍有可能与包括侵入性滋养层细胞（16）在内的其他表达 CD73 的细胞协同作用，从而营造出更具耐受性的环境，进而有助于成功妊娠的发生。最后，除了产生免疫调节/血管生成因子外，KIR+ CD39+ uNK 细胞还含有并释放了最多的细胞毒性效应分子。支持这一点的是，最近有研究表明，KIR 表达增加的 uNK 细胞含有更大的细胞毒性颗粒（56）。这可能对靶向入侵的滋养层细胞很重要，因为 KIR-HLA 关联与以滋养层细胞侵入母体蜕膜不足或过度为特征的妊娠疾病有关（12, 38-40）。
总之，我们提出了一种连续的 uNK 细胞分化模型。这种分化与月经周期和妊娠期间发生的生理变化密切相关，其功能也从促炎症向免疫调节倾斜。这些发现增加了我们对组织中淋巴细胞如何不断适应微环境变化的理解，并且对于子宫免疫学和妊娠的理解具有重要意义。
材料和方法（略）。

参考文献（略）。

下篇：

生殖免疫的核心：子宫内膜异位症和腺肌症的免疫炎症、生殖破坏、妊娠失败等相关病理生理，三、子宫内膜异位症和腺肌症、肌瘤等相关免疫炎症、生殖破坏、妊娠失败等相关病理生理，（三、175、139）了解母胎界面自然杀伤细胞的异质性：对妊娠健康与疾病的启示

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黄尚志（北京协和医学院）；姚宏（重庆医大二院）；黄昱（北京大学遗传学系）；刘雅萍（北京协和医学院，北京协和医院）；闫有圣（北京妇产医院）；王立峰（）；任雪（会元遗传）；陈菲云（会元遗传）；王若光（若光医学中心）。

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专辑总目录（已发文章链接，如下）

（三、175）大月分流产，早产与母胎界面专辑

（三、175、1）早产的炎症机制和新兴的抗炎干预措施
（三、175、2）早产炎症：与先天免疫和获得性免疫相关的早产新机制（链接）
（三、175、3）前置血管与极早早产：一项基于人群的研究

（三、175、4）子宫内膜异位症患者早产的系统评价和Meta分析

（三、175、5）子宫内膜异位症相关遗传因素及其在早产中的作用：一项两样本孟德尔随机化研究

（三、175、6）子宫内膜异位症与早产及妊娠期长短无关？

（三、175、7）综述产前皮质类固醇加速有早产风险的妇女的胎儿肺成熟

（三、175、8）B 细胞在子痫前期病理生理学中的作用：围产期细胞疗法的一个潜在靶点？（链接）

（三、175、9）足月妊娠和早产中的母体和胎儿T细胞

（三、175、10）早产与成年期死亡率：一项系统综述

（三、175、11）宫内炎症激活、功能性黄体酮戒断以及足月和早产的时间

（三、175、12）伴或不伴有先兆子痫的早产妇女妊娠中期炎症和代谢标志物

（三、176、13）早产子痫前期与足月子痫前期共享免疫相关基因的分子特征及潜在临床意义探讨

（三、175、14）极早产儿的胎盘编程、围产期炎症和神经发育障碍

（三、175、15）性腺类固醇激素在免疫耐受与炎症反应中的作用机制及其与早产的关系

（三、175、16）炎症介导的早产的预测因素

（三、174、17）孕激素、炎症和早产综述

（三、175、18）IVFICSI术后早产的相关危险因素

（三、175、19）氨基酸预防早产儿死亡率和发病率系统综述和网络荟萃分

（三、175、20）孕酮与早产（+孕酮维持）

（三、175、21）补充孕激素降低自发性早产临产和分娩风险

（三、175、22）孕激素维持治疗对早产后延长妊娠的系统评价和荟萃分析

（三、175、23）产前母体应激导致早产并影响小鼠新生儿适应性免疫

（三、175、24）调节性 T 细胞在早产和相关妊娠结局中的免疫调节作用

（三、175、24）复发性流产后的早产：一项系统评价和荟萃分析

（三、175、25）基于炎症相关血浆蛋白组合的妊娠 34 周前自然性早产的早期预测

（三、175、26）极早产儿的胎盘编程、围产期炎症和神经发育障碍

（三、175、27）来自循环外泌体样囊泡的α – 2巨球蛋白在早产妇女中增加

（三、175、28）母胎界面的单细胞分析揭示了人类自发性早产中PD – L1+非免疫细胞的缺乏

（三、175、29）母体外周血表观遗传时钟加速老化与早产

（三、175、30）细胞外基质韧性调节人宫颈平滑肌收缩能力——对宫颈早衰和自发性早产的新认识

（三、175、31）有自发性早产史妇女服用己酸羟孕酮的安全性评价

（三、175、32）自发性早产的预防——当前进展综述
（三、175、33）自发性早产的全血参数及炎症标志物评估
（三、175、34）早产治疗的现状与未来之路（链接）
（三、175、35）蜕膜巨噬细胞作为早产治疗的靶点

（三、175、36）妊娠期宫颈功能与疾病：单细胞分析的新见解

（三、175、37）宫颈重塑的细胞动力学：来自早产和足月分娩的见解

（三、175、38）宫颈机能不全临床亚型与妊娠结局之间的关联：一项回顾性队列研究

（三、175、39）宫颈阴道液中的多聚唾液酸糖链可能是早产的一个潜在标志物

（三、175、40）中性粒细胞与淋巴细胞比值炎症生物标志物与自发性早产的相关性：一项系统评价和荟萃分析

（三、175、41）妇女健康和孕产妇护理服务：抓住错失的机遇预防和管理早产

（三、175、42）跨部门干预措施：为降低早产率而实现的整合（+甲氧苄啶–磺胺甲恶唑）

（三、175、43）出生过早：加速变革至2030年及以后

（三、175、44）出生过早：尊重和基于权利的早产护理的进展和优先事项

（三、175、45）出生过早：从过去吸取教训，加快未来十年的行动

（三、175、46）出生过早：早产的全球流行病学和变化的驱动因素

（三、175、47）系统性红斑狼疮各亚组的不良妊娠结局：心血管事件的意义

（三、175、48）系统性红斑狼疮（SLE）中母胎耐受缺失（FaMaLE）：一项前瞻性队列研究，旨在探寻妊娠并发症背后的分子机制（+印度）

（三、175、49）早产早产儿幸存者运动生理反应的荟萃分析和分娩导致产时死产或新生儿死亡的妇女心理经历：一项空洞的系统回顾

（三、175、50）早产儿幸存者运动生理反应的荟萃分析

（三、175、51）中晚期早产：了解呼吸系统后果及可改变的风险因素

（三、175、52）妊娠期肝内胆汁淤积症与妊娠期糖尿病：关联、危险因素及结局的范围综述方案

（三、175、53）妊娠期肝内胆汁淤积症与早产及子代低出生体重的关联：一项前瞻性队列研究和孟德尔随机化研究

（三、175、54）早产和死产：妊娠期肝内胆汁淤积症中总胆汁酸水平与双胎妊娠结局：一项 2014 年至 2022 年的回顾性队列研究

（三、175、55）孕激素预防病因不明复发性流产的研究进展（综述）

（三、175、56）妊娠中期母体炎症与不良分娩结局：一项前瞻性队列研究

（三、175、57）口腔微生物组与不良妊娠结局

（三、175、58）妊娠期产丁酸菌的维持：缓解菌群失调所致早产

（三、175、59）阴道微生物群与早产：一项系统综述

（三、175、60）年龄在阴道微生物群与早产关联中的中介作用

（三、175、61）与复发性自发性早产相关的阴道微生物群特征：一项前瞻性队列研究

（三、175、62）JUND 在妊娠期人类子宫平滑肌从静止状态向收缩状态的转变中发挥着全基因组范围的作用

（三、175、63）环境影响儿童健康结果队列研究中的公共供水砷含量与出生结局

（三、175、64）邻苯二甲酸酯暴露与早产关联的敏感期：来自 16 项美国队列研究的汇总分析结果

（三、175、65）母亲多金属暴露与血脂异常的关联：一项关于空气污染对妊娠结局影响的研究

（三、175、66）父母接触金属混合物与早产之间的关联：一项前瞻性出生队列研究（+砷暴露与宫内生长受限之间的关联：一项系统综述和荟萃分析）

（三、175、67）妊娠期糖尿病女性中母体血脂水平对不良妊娠结局的影响

（三、175、68）铜与早产风险的关联及血清脂质的潜在中介作用

（三、175、69）探讨早产和低出生体重作为环境敏感性因素：一项关于社会情感和认知方面的综述研究

（三、175、70）Th17-Treg 细胞失衡可能促发自发性早产

（三、175、71）母体维生素 D 水平对早产的影响：一项多中心观察性试点研究的可行性研究

（三、175、72）维生素 D 相关的早产儿和足月儿出生时的风险因素：一项回顾性研究

（三、175、73）关注早产的起源：为何理解病因对于优化结局至关重要

（三、175、74）低剂量阿司匹林对妊娠结局影响的评估：一项系统评价和荟萃分析

（三、175、75）早产中的肥胖悖论：一项病例对照研究

（三、175、76）代谢功能障碍相关脂肪性肝病与妊娠

（三、175、77）母体血浆外泌体小核糖核酸作为评估早产风险的潜在生物标志物

（三、175、78）胎膜早破患者血红蛋白水平的初始值及纵向变化轨迹可预测其预后

（三、175、79）不同子宫内膜异位症病灶类型女性的妊娠结局：现有证据综述

（三、175、80）子宫腺肌病与生育能力的最新研究进展

（三、175、81）偏头痛、偏头痛亚型与不良妊娠结局之间的关联：一项系统评价和荟萃分析

（三、175、82）母体血清转甲状腺素蛋白浓度与妊娠及分娩结局的相关性

（三、175、83）体外受精双胞胎与自然受孕双胞胎中早产儿的临床特征差异

（三、175、84）临床应用mNGS和ENA-78检测羊膜内感染/炎症

（三、175、85）不同年龄段孕妇妊娠风险的比较研究

（三、175、86）预防双胎妊娠早产：国际Delphi的共识

（三、175、87）早孕期先兆流产与青少年晚期子女抑郁或焦虑之间的关联

（三、175、88）全基因组血浆游离 DNA 核小体足迹可预测早产：一项病例对照研究

（三、175、89）双胎妊娠中阴道给药孕酮对骨转换及氧化应激的影响

（三、175、90）无症状双胎妊娠自发性早产预测的新型超声及生化工具评估

（三、175、91）社会脆弱性指数与不良妊娠结局之间的关联

（三、175、92）氨茶碱预防早产的随机可行性耐受性研究

（三、175、93）产前皮质类固醇暴露对胎儿发育潜在脱靶效应的综述

（三、175、94）单角子宫女性双胎妊娠的围产期结局

（三、175、95）妊娠 28 至 34 周胎膜早破期待治疗与积极引产的比较——一项前瞻性观察研究（+妊娠 32 至 34 周胎膜早破期待治疗延长的安全性和有效性——一项随机对照试验）

（三、175、96）探究饮食失调与生殖健康之间的关系，重点关注生育能力、产科及胎儿结局：一篇叙述性综述

（三、175、97）孕期暴露于 PM2.5 与早产的关联以及胎盘 miRNA-21 调节 TLR4/NF-κB 并激活 NLRP3 炎性小体的潜在作用的体外和体内证据

（三、175、98）早产晚期胎膜早破：反对期待疗法的论据

（三、175、99）预测自发性早产的知识图谱

（三、175、100）妊娠 34 周后对双胎妊娠中存在晚期早产高风险的孕妇进行产前皮质类固醇治疗

（三、175、101）新生儿科中神奇的类固醇激素世界——最初的 50 年

（三、175、102）胃肠道紊乱、血脂水平、炎症标志物与早产之间的关系

（三、175、103）一种用于预防自发性早产的新型钾通道开放剂：将概念整合起来

（三、175、104）睡眠特征与不良妊娠结局风险的关联：一项孟德尔随机化分析

（三、175、105）母体甲状腺功能及妊娠期糖尿病与妊娠结局的关联：一项回顾性队列研究

（三、175、106）自发性早产：涉及多处胎儿–母体组织和器官系统，机制和途径各异

母胎界面专辑

（三、175、107）母胎界面的免疫反应

（三、175、108）胎盘的分子和免疫学进展

（三、175、109）妊娠期间的胎儿–母体相互作用：“三位一体”的视角

（三、175、110）母胎界面与胎盘介导并发症之间的相关性

（三、175、111）母体肠道微生物群影响母胎界面的免疫激活，从而影响妊娠结局

（三、175、112）子痫前期的免疫学方面

（三、175、113）子痫前期病理生理学中的细胞免疫反应

（三、175、114）巨噬细胞与子痫前期：母胎界面巨噬细胞极化失衡

（三、175、115）对 T 细胞免疫在子痫前期中作用的全面综述

（三、175、138）人类子宫自然杀伤（uNK）细胞在子宫内膜再生和妊娠期间的持续分化

（三、175、116）解读子痫前期特异性免疫微环境及母胎界面促炎性巨噬细胞的作用

（三、175、117）子痫前期无菌性炎症的病因学价值：它是一种非感染性妊娠并发症吗？

（三、175、118）胎盘母胎界面巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬作用的免疫调节效应

（三、175、119）自噬和免疫在母胎界面的最新见解

（三、175、120）在宫内炎症期间，IL-1 和 TNF 在母胎界面介导IL-6 信号传导

（三、175、121）社论：母胎界面的病毒感染

（三、175、122）妊娠期病毒感染的发病机制

（三、175、123）STAT 信号通路在妊娠及妊娠相关疾病中的研究进展

（三、175、124）妊娠早期 HLA-G 对免疫细胞调节功能的分子机制

（三、175、125）蜕膜催乳素对人胎膜和胎盘的免疫调节作用

（三、175、126）雌激素敏感激活的 SGK1 在母胎界面诱导具有抗炎特性的 M2 巨（三、175、127）噬细胞和 Th2 反应

（三、175、128）肠道微生物组与复发性流产的相关性：综述

（三、175、129）人类蜕膜自然杀伤细胞独特的代谢和蛋白质表达特征

（三、175、130）孕酮对母胎界面及母体循环免疫细胞功能的影响

（三、175、131）促炎和抗炎细胞因子在复发性流产中的免疫调节更新作用

（三、175、131）母胎界面的单细胞免疫生物学

（三、175、132）半乳糖凝集素：正常妊娠与病理妊娠中的重要调节因子

（三、175、133）细胞外囊泡与妊娠期间的免疫反应：一种平衡行为

（三、175、134）HLA-GKIR2DL4 在乳腺癌免疫微环境中的作用

（三、175、135）母胎界面的先天免疫防御机制

（三、175、136）妊娠期间固有免疫细胞的调节：免疫检查点视角

（三、175、137）蜕膜自然杀伤细胞中的微小 RNA：妊娠期间值得关注的调节因子

本文：（三、175、138）人类子宫自然杀伤细胞在子宫内膜再生和妊娠期间的持续分化

（三、175、139）了解母胎界面自然杀伤细胞的异质性：对妊娠健康与疾病的启示

（三、175、140）细胞因子、激素及有利于成功繁殖的细胞调节机制

（三、175、141）妊娠期中性粒细胞：对先天性和适应性免疫调节的新见解

（三、175、142）母胎界面的免疫微环境

（三、175、143）母胎界面的免疫反应

（三、175、144）母胎界面病原体的先天免疫反应

（三、175、145）合体滋养细胞的免疫学研究

（三、175、146）母胎免疫与复发性自然流产

（三、175、147）人胎盘内血管外滋养层细胞的免疫调节特性

（三、175、148）体外 mRNA-S 母体疫苗接种诱导母胎界面免疫调节发生改变

（三、175、149）静脉注射免疫球蛋白在免疫性复发性流产中是否发挥作用？

（三、175、150）炎症细胞因子对复发性流产的影响：一项初步研究

（三、175、151）蜕膜和胎盘中的 NOD1 与正常妊娠和子痫前期妊娠中的炎症有关

（三、175、152）γδT细胞在妊娠及妊娠相关并发症中的作用

（三、175、153）先天性和适应性免疫的性别差异影响胎儿、胎盘和母体健康i

（三、175、154）母胎免疫中下一代免疫检查点分子

（三、175、155）母胎界面与胎盘介导并发症之间的相关性

（三、175、156）芳烃受体在母胎界面营养代谢和免疫调节中的作用

（三、175、157）母胎界面滋养层细胞和巨噬细胞的串扰：现状和未来前景

（三、175、158）妊娠期间调节性 T 细胞作用的再思考：母胎界面与外周部位调节性 T 细胞的差异特征以及早孕期与晚孕期调节性 T 细胞的差异特征

（三、175、159）人类早期母胎界面的单细胞重建

（三、175、160）人类母胎界面的空间分辨时间轴（解析时间线）

（三、175、161）单细胞转录组分析揭示了人类母胎界面的细胞和分子差异

（三、175、162）人类妊娠期间母胎界面病毒性感染的先天免疫反应

（三、175、163）母胎界面的单细胞免疫生物学

（三、175、164）早期妊娠滋养层细胞发育的空间多组学图谱

（三、175、165）人类胎盘的空间多组学分子分辨率图谱

（三、175、166）人类滋养层细胞融合模型的全面综述：近期进展与挑战

（三、175、167）人类胎盘合体滋养层细胞的单细胞多组学分析揭示了妊娠期间的细胞轨迹

（三、175、168）植入过程中人滋养细胞侵袭的微生理模型

（三、175、169）子宫内膜蜕膜化状态调节明胶甲基丙烯酰水凝胶中子宫内膜微血管复杂性和滋养层细胞的生长

（三、175、170）胎盘综合征——围产医学的新范式（链接）