研究背景
调节性 T 细胞（Treg） 是 CD4⁺ T 细胞家族中负责“刹车”的那一支：它们依赖转录因子 FOXP3 稳定谱系与功能，在健康状态下防止自身免疫、限制过度炎症。进入肿瘤后，这种“刹车本能”会被放大，削弱局部的抗肿瘤反应。
传统观点将 Treg 分为胸腺来源的 tTreg 与外周诱导的 pTreg；在人类肿瘤样本中，更常见的是与 tTreg 亲缘更近的一群被迁入并扩增的 Treg。表型上，一个沿用已久的经验框架是“静息—效应型”二分：静息 Treg 多为 CD45RA⁺CD25lowFOXP3low，而效应型（eTreg）呈 CD45RA⁻CD25highFOXP3high，并伴随 CTLA4/TIGIT 等抑制分子上调，抑制力和增殖活性更强。功能层面，Treg 既可通过 CD25 “截留” IL-2 以限制效应 T 细胞扩增，也能以 CTLA4 干扰抗原呈递细胞的共刺激信号，还常通过 IL-10、TGF-β、IL-35 与 CD39/CD73-腺苷通路 营造抑制性场域。
把“它是谁、长什么样、靠什么刹车”讲清楚，便能顺畅地过渡到下文的两件事：它们为何会被源源不断地招进来并滞留，以及哪一类 Treg 与免疫治疗的疗效此消彼长。
应用解读
一、单细胞 RNA 测序与 TCR 测序揭示非小细胞肺癌肿瘤浸润 Treg 细胞异质性，OX40hiGITRhi Treg 亚群与 PD-1 阻断治疗耐药相关
样本来源
本研究纳入两类非小细胞肺癌（NSCLC）患者人群：
一类是接受两剂新辅助抗 PD-1 治疗后手术的患者，获取其 resected tumor（n=15）、adjacent NL（n=12）、TDLN（n=3）及脑转移灶（n=1）样本
另一类是未接受治疗的初治患者，获取其 resected tumor（n=10）及配对 adjacent NL（n=8）样本
分析方法
对上述样本中的 T 细胞进行耦合单细胞 RNA 测序（scRNA-seq）与 T 细胞受体测序（TCR-seq），经质量控制后聚焦 73,882 个肿瘤浸润调节性 T 细胞（TIL-Treg）展开分析。 通过 UMAP 降维得到 10 个独特的 Treg 亚群并标注（图 1a），以热图展示各亚群顶部差异基因的相对表达（图 1b），用 UMAP 投影红色刻度呈现经典 Treg 亚群标志物及亚群选择性基因的表达（图 1c），经主成分分析（PCA）发现肿瘤与 adjacent NL 样本的 Treg 伪批量基因表达差异显著（canonical correlation=0.56，P<0.001）（图 1d），而 ICB 治疗应答者（R）与非应答者（NR）肿瘤的 Treg 伪批量基因表达无显著差异（canonical correlation=0.36，P=0.50）（图 1e）。
研究结论详解
研究发现 OX40hiGITRhi Treg 具有强免疫抑制功能，体外实验显示其对常规 CD4+T 细胞增殖的抑制能力显著强于 OX40lowGITRlow Treg（图 2a）；火山图揭示该亚群（Activated (1)/OX40hiGITRhi）与其他 Treg 的差异基因，其中 LAG3、TNFRSF18、TNFRSF4 为顶部差异基因（图 2b），将激活 Treg 评分叠加于 UMAP 显示不同应答 / 治疗组的表达差异（图 2c），统计发现 NR 肿瘤中高激活评分 Treg 比例显著高于 R 肿瘤，初治肿瘤与 NR 肿瘤相近，且该差异仅存在于肿瘤组织，adjacent NL 无差异（图 2d）。
TCR 克隆共享热图显示 Activated (1)/OX40hiGITRhi 与 Activated (3) 亚群克隆共享频率最高（图 2e），扩散轨迹与 RNA velocity 分析表明 R 与 NR 肿瘤中两亚群的分化方向相反（图 2f），箱线图验证 R 肿瘤中 Activated (1)/OX40hiGITRhi 相对 Activated (3) 的比例显著低于 NR 和初治肿瘤（图 2g）；小提琴图显示新抗原特异性 CD8+T 细胞的 TNFSF4（OX40L）表达高于流感特异性 CD8+T 细胞（图 2h），且 NR 肿瘤中新抗原特异性 CD8+T 细胞的 TNFSF4 表达显著高于 R 肿瘤（图 2i），基因集富集分析（GSEA）揭示 OX40L、41BBL、GITRL 刺激对 Treg 生物学功能的影响（图 2j），提示新抗原特异性 CD8+T 细胞可能通过 TNFSF4 促进 OX40hiGITRhi Treg 扩增，进而关联 PD-1 阻断治疗耐药。
该研究聚焦非小细胞肺癌（NSCLC）肿瘤浸润调节性 T 细胞（TIL-Treg），核心结论为 TIL-Treg 存在显著转录组异质性，且不同亚群对免疫检查点阻断（ICB）治疗反应具有相反影响。
研究鉴定出人类 TIL-Treg 的 10 个独特亚群，小鼠 TIL-Treg 的 5 个亚群，跨物种亚群转录组高度同源。其中，OX40hiGITRhi Treg 亚群抑制功能最强，其富集与 PD-1 阻断治疗耐药相关；而肿瘤相关抗原（TAA）特异性 Treg 亚群会逐渐获得 TH1 样表型，下调 FoxP3 并上调 IFNG 等基因，该 TH1 样 Treg 亚群在 ICB 治疗应答肿瘤中富集。这些发现揭示 TIL-Treg 亚群的功能分化差异，为通过调控特定 Treg 亚群改善 NSCLC 免疫治疗疗效提供依据。
二、结直肠癌等肿瘤中 Treg 招募机制解析：CCR4 介导 Treg 向 mregDC 聚集形成抑制性 niche，削弱抗肿瘤免疫的研究
样本来源
本研究纳入多类样本解析调节性 T 细胞（Treg）与免疫调节分子富集的成熟树突状细胞（mregDC）的关系：
小鼠样本涵盖 ApcMin/+ 自发结直肠癌模型、VillinCre Apcf/+ 肠道上皮特异性 Apc 敲除模型、Ccl22tdTomato 报告小鼠等
人类样本包括结直肠癌组织及 TCGA 数据库中结直肠癌（COAD）、乳腺癌（BRCA）、肺癌（LUAD）、黑色素瘤（SKCM）等多癌种数据
技术方法
采用scRNA-seq、TCR 测序、多色免疫荧光、流式细胞术、CellPhoneDB 配体 – 受体分析、GSVA 基因集富集等检测方法，获取 23922 个高质量免疫细胞转录组数据（含 14445 个肿瘤来源细胞、9477 个正常结肠组织细胞）。
研究结论详解
研究明确 Treg 与 mregDC 存在紧密分子关联：通过 UMAP 降维分析，免疫细胞分为 B 细胞、中性粒细胞等 8 个主要集群，其中 T/ILC 集群进一步细分出 Treg，DC 集群细分出 4 个亚群（图 2a）；肿瘤 Treg 存在 “激活型” 和 “静息型” 两种状态，激活型 Treg 高表达 Pdcd1、Ctla4、Icos 等基因（图 2b）；DC 亚群中 CCL22+ mregDC 高表达成熟标志物（CD80、CD86）、迁移标志物（CCR7）及免疫调节基因（PD-L1）（图 2c）。
通过 CellPhoneDB 预测，mregDC 与 Treg 间存在 CCL22/17-CCR4、CXCL16-CXCR6 等趋化轴及 PD-1-PD-L1、CTLA-4-CD80/86 等表面分子相互作用（图 2d）；以弦图呈现，Treg 与 mregDC 存在优先相互作用关系（图 2e）；在 COAD 中，FOXP3（Treg 标志基因）与 mregDC 特征基因（CCL22、CCR7、LAMP3）显著正相关（图 2f）；热图显示，COAD 中 mregDC 与 Treg 特征基因的相关性显著强于 cDC1、cDC2、pDC 等其他 DC 亚群（图 2g）；在 BRCA、LUAD、SKCM 等多癌种中，mregDC 与 Treg 特征基因均呈正相关，证明二者关联具有跨癌种普遍性（图 2h）。
研究证实 CCR4 可介导 Treg 招募至 mregDC 并促进肿瘤进展：
14 周龄 ApcMin/+ Ccr4fl/fl 与 ApcMin/+ Foxp3Cre Ccr4fl/fl 小鼠小肠和结肠肿瘤的代表性图像，直观展示了 Treg 特异性敲除 CCR4 对肿瘤的影响（图 5a）；图 5b 定量结果显示，Treg 特异性敲除 CCR4 后，小鼠小肠（总肿瘤灶及 > 2mm 肿瘤灶）和结肠肿瘤灶数量均显著减少（图 5b）；为明确 CCR4 对 Treg 迁移的作用，设计 Treg 过继转移实验：将 tdTomato + 野生型（WT）Treg 与 GFP+ Ccr4-/- Treg 按 1:1 比例混合，静脉转移至已形成肿瘤的 ApcMin/+ 小鼠（图 5c）；转移后肠系膜淋巴结（mLN）和肿瘤中 Treg 的代表性流式细胞术图及定量结果显示，CCR4-/- Treg 在肿瘤中的比例显著低于 WT Treg，而在 mLN 中二者比例相近，证明 CCR4 对 Treg 向肿瘤迁移至关重要（图 5d、图 5e）；肿瘤内 CCR4-/- Treg 的 PD-1、TIM-3、CTLA-4、OX40、ICOS 等激活标志物表达水平显著低于 WT Treg（图 5f）；
为进一步验证 CCR4 对 “Treg-mregDC – 淋巴” niche （功能单元）形成的作用，设计骨髓嵌合实验：将 Ccl22tdTomato 小鼠骨髓细胞与 Ccr4-/- Ubi-GFP 小鼠骨髓细胞按 1:1 混合，移植至辐照后的 ApcMin/+ 小鼠（图 5g）；嵌合后肿瘤的免疫荧光成像及定量结果显示，CCR4-/- Treg 在 niche 中的比例显著降低，且与 mregDC 的平均距离显著大于 WT Treg（图 5h、图 5i）；niche 中 Treg PD-1 表达的成像及定量表明，niche 内 CCR4-/- Treg 中 PD-1high 细胞比例及 PD-1 表达平均强度均显著低于 WT Treg，证实 CCR4 是 Treg 向 mregDC 招募、激活及促进肿瘤进展的关键分子（图 5j、图 5k）。
在该研究中，Treg 从淋巴结被招募至肿瘤区域的过程受特定趋化信号调控：肿瘤淋巴管内皮细胞分泌 CCL21，通过结合免疫调节分子富集的成熟树突状细胞（mregDC）表面的 CCR7，将 mregDC 招募至肿瘤基质的淋巴周围区域；随后 mregDC 分泌 CCL22 与 CCL17，借助与 Treg 表面 CCR4 的结合，构成核心趋化轴，引导 Treg 从淋巴结向肿瘤迁移，最终在淋巴周围区域形成 “Treg-mregDC – 淋巴” 功能单元。
针对Treg潜在的治疗方案
Treg 功能重编程：靶向表型与代谢逆转抑制特性
该治疗路径核心是通过分子干预改变肿瘤浸润 Treg 的功能状态，使其失去免疫抑制能力，甚至转化为促炎表型，同时避免影响全身免疫稳态。关键策略包括靶向 Treg 表面的共刺激 / 共抑制受体（如 OX40、4-1BB、CTLA4）及代谢转运体（如 MCT1、CD36）：一方面，利用双特异性激动抗体（如 OX40/4-1BB 双抗）精准作用于肿瘤 Treg，在激活效应 T 细胞的同时，诱导 Treg “脆弱化”—— 下调 FOXP3 表达、减少 IL-10 分泌，甚至产生 IFNγ 等促炎细胞因子，打破其抑制功能；另一方面，针对 Treg 依赖的代谢途径，如通过 MCT1 抑制剂阻断乳酸摄取、CD36 拮抗剂抑制脂肪酸吸收，削弱其在低葡萄糖肿瘤微环境（TME）中的代谢适应能力，间接降低其抑制活性。例如，临床前研究显示，OX40/4-1BB 双抗可使肿瘤 Treg lineage 稳定性下降，伴随效应 T 细胞浸润增加，且无明显全身自身免疫副作用，体现出 “精准调控而非全面清除” 的优势。
Treg 选择性耗竭：靶向肿瘤特异性标志物清除抑制性亚群
此路径聚焦通过抗体介导的细胞毒性作用，优先清除肿瘤内高抑制性 Treg 亚群，同时尽量保留外周 Treg 以维持免疫耐受。核心靶点为肿瘤 Treg 高表达且与抑制功能强相关的分子，如 CD25（IL-2 受体 α 链）、CTLA4 及 TIGIT：抗 CD25 抗体通过优化 Fc 结构，可在介导 ADCC/ADCP 清除 Treg 的同时，保留效应 T 细胞的 IL-2 信号传导，避免传统抗 CD25 药物对效应 T 细胞的抑制；抗 CTLA4 抗体则通过结合 Treg 表面高表达的 CTLA4，借助巨噬细胞或 NK 细胞的 Fcγ 受体，选择性清除肿瘤内 CTLA4high Treg，减少其对 DC 细胞 CD80/86 的吞噬，恢复效应 T 细胞活化。此外，针对肿瘤 Treg 特异性标志物 TIGIT 的抗体，可仅清除肿瘤内 TIGIT+ Treg，降低外周 Treg 脱靶消耗风险，例如临床前模型中抗 TIGIT 抗体可使肿瘤 Treg 比例下降 40% 以上，同时 CD8+T 细胞杀伤活性提升，且无明显自身免疫症状。
Treg 招募阻断：干扰趋化轴阻止 Treg 进入肿瘤微环境
该策略通过阻断趋化因子受体 – 配体相互作用，阻止外周 Treg 被招募至肿瘤，从源头减少 TME 中抑制性细胞的积累。核心靶点为介导 Treg 肿瘤归巢的关键趋化轴，其中 CCR4-CCL22/17 轴最为关键 —— 肿瘤细胞及肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）分泌的 CCL22/17，可特异性结合 Treg 表面的 CCR4，引导其向肿瘤淋巴周围 niche 聚集；使用 CCR4 拮抗剂或中和抗体，可显著减少 Treg 向肿瘤的迁移，例如黑色素瘤模型中抗 CCR4 抗体可使肿瘤内 Treg 比例降低 35%，同时增强 CD8+T 细胞浸润。
此外，针对 CCR8-CCL1、CXCR4-CXCL12 等其他趋化轴的阻断剂，也可辅助抑制 Treg 招募，例如 CXCR4 拮抗剂 AMD3100 可阻止 Treg 被 CXCL12 吸引至卵巢肿瘤，且不影响效应 T 细胞的肿瘤归巢。这种路径的优势在于不干扰已进入肿瘤的效应免疫细胞功能，仅切断 Treg 的 “补给线”，适合与免疫检查点抑制剂联合使用以增强疗效。