|
DNA 甲基化是一种化学修饰，也是 mRNA 表达的重要表观遗传调控。DNA 功能元件（包括启动子和增强子）的高甲基化通常会导致转录沉默。31 为了研究 DNA 甲基化是否调控 BTLA mRNA 的表达，作者首先将 BTLA 基因内 3 个 CpG 位点的甲基化水平与该基因的 mRNA 表达值相关联，这些样本来自 TCGA 的 366 份转移性 SKCM 样本。这些 CpG 位点的甲基化由 Illumina Infinium HumanMethylation450 BeadChip 检测。根据 Illumina Infinium HumanMethylation450 BeadChip 的基因组坐标，作者使用 Ensembl 基因组浏览器 11332 绘制了位于 3 号染色体反链上的 BTLA 基因基因组组织上的 3 个 CpG 位点。BTLA 有四个转录本，包括两个蛋白质编码转录本（BTLA-201 和 BTLA-202）和两个非蛋白质编码转录本（BTLA203 和 BTLA-204）（ 图 1）。两个蛋白质编码转录本的转录起始位点彼此靠近。2 个 CpG 位点（cg24157392 和 cg03995631）位于 BTLA 基因的启动子区，cg00477226 位于 BTLA-201 转录本的外显子 5 中。
Pearson 相关分析显示，BTLA mRNA 表达与 2 个 CpG 位点的 DNA 甲基化之间存在显著的负相关关系，包括 cg03995631（ 图 2A，R=−0.74，p<0.001）和 cg24157392（ 图 2B，R=−0.81，p<0.001）。然而，位于外显子 5 上的 cg00477226 的甲基化水平（ 图 2C，R = 0.018，p = 0.73）与 BTLA 的 mRNA 表达没有显着相关性。有趣的是，作者观察到位于启动子区域的 cg24157392 和 cg03995631 之间的甲基化水平具有显着的一致性（ 图 2D，R=0.87，p<0.001）。然后将这两个 CpG 位点的平均β值定义为启动子甲基化。正如预期的那样，启动子甲基化水平与 BTLA mRNA 表达呈负相关（ 图 2E，R=−0.8，p<0.001）。值得注意的是，大多数样品中 BTLA 的归一化 mRNA 表达（log2（FPKM+1））显著较低，通常小于 1，这对应于 BTLA 启动子的高甲基化水平（ 图 2E）。这些结果支持了通过启动子甲基化对 BTLA mRNA 表达进行表观遗传调控的观点。
图 2.366 例转移性黑色素瘤患者 DNA 甲基化与 BTLA mRNA 表达及预后的相关性。（A-C）CpG 位点（cg03995631、cg24157392 和 cg0047726）的β值与 BTLA mRNA 表达的 Pearson 相关性。（D）cg24157392 和 cg03995631 之间的甲基化相关性。（E）启动子甲基化水平（定义为 cg03995631 和 cg24157392 的平均β值）与 BTLA mRNA 表达的相关性。（F-G）黑色素瘤患者总生存期的 Kaplan-Meier 曲线根据 cg03995631 和 cg24157392 的中位 β 值进行分层。（H）这些患者总生存期的 Kaplan-Meier 曲线根据启动子甲基化水平分层，该水平由两个 CpG 位点的平均 Beta 值定义。（I）根据 BTLA mRNA 表达分层的这些患者总生存期的 Kaplan-Meier 曲线。
在 366 名转移性 SKCM 患者中，356 名患者有 OS 时间。为探讨BTLA 启动子甲基化和 mRNA 表达是否能预测黑色素瘤的预后，根据 2 个 CpG 位点的β中位值（cg03995631：0.8554，cg24157392：0.8603）和 BTLA 的中位 FPKM（0.3116），将 356 例转移性 SKCM 分层为两组（高组和低组），并将两组与 OS 相关。作者观察到 cg03995631（图 2F，p=0.013）和 cg24157392（图 2G，p=0.0015）的低甲基化与 OS 时间延长显着相关。根据 BTLA 启动子甲基化的中值（0.8547），由两个 CpG 位点的平均甲基化水平定义，作者还观察到属于低甲基化组的黑色素瘤患者的 OS（p = 0.0092）比属于高甲基化组的患者更长（图 2H）。作者观察到 BTLA 的启动子低甲基化反映了该基因的高 mRNA 表达水平。正如预期的那样，作者还发现 BTLA 的 mRNA 表达增加与 OS 时间延长有关（图 2I，p<0.0001）。使用 Cox 回归模型的多因素生存分析表明，BTLA 启动子低甲基化在转移性 SKCM 中保留为 OS 的独立预后因素（p=0.005）。总体而言，BTLA 启动子低甲基化与 mRNA 表达增加相关，这可用作良好预后的预测生物标志物。
启动子低甲基化与免疫细胞浸润增强和免疫治疗反应相关特征的 mRNA 表达水平升高有关
肿瘤浸润免疫细胞已被确定为预测预后的独立因素。33 因此，作者研究了 BTLA 启动子甲基化和 mRNA 表达对转移性 SKCM 肿瘤微环境 （TME） 中免疫细胞浸润的影响。TIMMER 2.0 网络应用分析揭示了 BTLA mRNA 表达与肿瘤纯度之间存在反比关系（图 3A），表明 BTLA 可能在抑制肿瘤生长方面发挥关键作用。在免疫细胞方面，BTLA mRNA 表达与 B 细胞、CD8+T 细胞、CD4+T 细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和 DC 的浸润水平呈正相关（图 3A），暗示 BTLA 可以影响淋巴细胞浸润。为了研究 BTLA 启动子甲基化是否也与免疫细胞浸润有关，作者比较了转移性 SKCM 样本中高 BTLA 启动子甲基化组和低 BTLA 启动子甲基化组之间 26 种免疫细胞类型的浸润水平，由 CIBERSORT 估计。作者发现，低启动子甲基化组中 15 种免疫细胞类型的丰度明显更高（图 3B）。其中，CD8+T 细胞、记忆 B 细胞、幼稚 B 细胞和 M1 巨噬细胞先前与 SKCM 的良好预后有关。33 34 此外，低启动子甲基化组的白细胞分数（从甲基化数据计算的白细胞分数（图 3C）和通过病理图像评估的 TIL 百分比（图 3D）均较高。低启动子甲基化组的细胞溶解活性评分（定义为 GZMA 和 PRF1 mRNA 表达值的几何平均值）35 也更高（图 3E）。这些发现表明，BTLA 启动子的低甲基化和 BTLA mRNA 表达升高与免疫细胞浸润水平升高有关，从而影响预后。
图 3.转移性黑色素瘤中 BTLA 启动子低甲基化与高免疫细胞浸润以及分子和途径转录组改变的相关性。（A）BTLA mRNA 表达与肿瘤纯度和免疫细胞（B 细胞、CD8+T 细胞、CD4+T 细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞）浸润水平的相关性。（B）高启动子甲基化组和低启动子甲基化组之间 TME 细胞绝对分数的比较。（C-E）箱线图显示了两组之间白细胞分数、TIL 百分比和细胞溶解活性的差异。采用 Wilcoxon 秩和检验比较两组所有统计学差异;**p<0.01， ***p<0.001， ****p<0.0001.（F）火山在低启动子甲基化组和高启动子甲基化组之间显示出差异表达的基因;具有 log2 倍变化>1 和 p<0.05 的基因被认为在低启动子甲基化黑色素瘤中上调。（G）低启动子甲基化组标志性基因集和通路富集（FDR<0.05）的基因集富集分析图。（H）两个 CpG 位点的甲基化水平与免疫检查点基因 mRNA 表达的相关性。（I-L）基因集富集评分的箱线图。箱线图显示中位数、第一和第三四分位数，胡须延伸至 IQR 的 1.5 倍，p 值是使用双侧 Wilcoxon 秩和计算的。（I）干扰素γ−6。（J）IFNγ扩增免疫 18。（K）效应 T 细胞。（L）IFNγ/效应 T 细胞。采用 Wilcoxon 秩和检验比较两组所有统计学差异;**p<0.01， ***p<0.001， ****p<0.0001.TIL，肿瘤浸润淋巴细胞;TME，肿瘤微环境。
为了揭示与BTLA 启动子甲基化相关的转录组学分子特征，作者根据两个 CpG 位点（cg24157392 和 cg03995631）的平均β值将 366 例转移性 SKCM 病例分为高启动子甲基化组和低启动子甲基化组，并进行两组间差异表达分析。作者发现低甲基化组中 2786 个基因的 mRNA 表达显着增加，包括 TIGIT、PDCD1、LGA3、HAVCR2、CD274、C10orf54 和 SIGLEC7 等 8 个免疫检查点基因。无偏倚基因集富集分析显示，低甲基化组中有 8 个标志性基因集和 41 个 KEGG 通路显著过高。值得注意的是，与抗癌免疫反应相关的标志性基因集和 KEGG 通路，如炎症反应、干扰素α反应、干扰素γ、抗原加工和呈递等，在低甲基化组中显着富集（图 3G）。作者还发现两个 CpG 位点的甲基化水平与免疫检查点基因的 mRNA 表达之间存在很强的负相关关系。BTLA mRNA 表达与这些基因的表达呈显著正相关，这意味着 BTLA 启动子甲基化可能调节 mRNA 表达并影响抗肿瘤免疫反应（图 3H）。此外，作者检查了先前与免疫治疗反应相关的四个基因集的表达，发现这些基因在低甲基化组中表达明显更多。与高甲基化组相比，低甲基化组的富集评分，例如 6 基因 IFNγ 特征、相关的 18 基因 IFNγ 特征、效应 T 细胞特征和组合 IFNγ/效应 T 细胞特征显着更高（图 3I，L）。
BTLA 启动子低甲基化与原发性黑色素瘤的 mRNA 表达、免疫细胞浸润和预后相关
为了验证BTLA 启动子甲基化与 SKCM 中生物学和免疫特性之间的联系，作者对来自 TCGA 的 104 个初级 SKCM 样品进行了相同的分析。与转移性 SKCM 一致，作者还发现 cg03995631（R=−0.48，p<0.0001， cg24157392（R=−0.56，p<0.0001，）的甲基化水平与 BTLA mRNA 表达呈显著负相关。此外，cg03995631 和 cg24157392 之间的甲基化水平呈显著正相关（R=0.67，p<0.0001，）。正如预期的那样，位于启动子区域的两个 CpG 位点的平均甲基化水平与 BTLA mRNA 表达表现出相当大的负相关（R=−0.56，p<0.0001，）。以 2 个 CpG 位点的平均甲基化水平为基础，将 104 个初级 SKCM 样品分为高启动子甲基化组和低启动子甲基化组。与转移性 SKCM 平行，作者观察到各种免疫细胞类型的细胞组分，包括 CD8 + T 细胞，激活记忆 CD4 + T 细胞，T 滤泡辅助细胞，活化 NK 细胞和 M1 巨噬细胞，在低甲基化组中明显高于高甲基化组。低甲基化组 DNA 甲基化推断的白细胞分数和细胞溶解活性评分也较高。 当作者查看 BTLA 启动子甲基化的预后价值时，cg03995631 的高甲基化水平（p=0.0023，）与 104 名原发性 SKCM 患者的 PFS 降低显着相关。此外，cg03995631 甲基化水平高的患者往往 PFS 较差。随后，以 cg03995631 和 cg03995631 的平均β值定义的 BTLA 启动子的高甲基化与 PFS 差显著相关。综上所述，基于 104 个初级 SKCM 样本的研究进一步证实了 BTLA 启动子甲基化与 BTLA mRNA 表达、免疫细胞浸润和预后之间的显著负相关关系。
采用独立队列，包括47 例来自 GSE51547 的 III/IV 期黑色素瘤肿瘤，以进一步验证 BTLA 启动子甲基化的预后价值。作者根据 cg03995631、cg24157392 和启动子甲基化β值（分别为 0.878、0.896 和 0.869）的中位值将 47 名患者分为高甲基化组和低甲基化组。基于 cg03995631（图 4A，p=0.016），cg24157392（图 4B，p=0.00022）和启动子（图 4C，p=0.0021）甲基化水平的生存分析表明，BTLA 启动子低甲基化的患者表现出显着延长的 OS 时间。作者还对受试者工作特征进行了曲线下面积（AUC） 分析，以比较 cg03995631（图 4D）、cg24157392（图 4E）和 BTLA 启动子（图 4F）的甲基化水平预测不同截止时间（2、3 和 5 年）死亡的敏感性和特异性。然后作者发现 5 年生存率的 AUC 分别达到 0.88（cg03995631）、0.94（cg24157392）和 0.92（BTLA 启动子）。Guo 等人开发了一种四 DNA 甲基化生物标志物，用于预测皮肤黑色素瘤患者的 OS。然而，从 GSE51547 开始，四 DNA 甲基化生物标志物仅达到 0.708 的 AUC，用于预测队列的 5 年生存率。与 Guo 等人 36 鉴定的四 DNA 甲基化生物标志物相比，BTLA 启动子甲基化在预测黑色素瘤患者的 OS 方面表现出优异的性能。
图 4.验证 BTLA 甲基化与独立黑色素瘤队列和接受免疫检查点阻断 （ICB） 治疗的 FAHZZU 队列预后和 mRNA 表达的相关性。（A-C）OS 分析基于 cg03995631（A）、cg24157392（B）和启动子（C）甲基化水平。（D-F）cg03995631 （D）、cg24157392 （E） 和启动子 （F）甲基化水平的 ROC 分析预测 5 年 OS。（G-H）在 Newell 研究中接受免疫疗法治疗的黑色素瘤队列中，cg24157392 （G） 和 cg03995631 （H） 甲基化与 BTLA mRNA 表达的相关性。（I-J）基于 Newell 研究队列中 cg24157392 （I） 和 cg03995631 （J） 甲基化水平的无进展生存期分析。（K）散点图显示 BTLA mRNA 表达与 qMSP 测量的 cg24157392 位点甲基化水平之间的负相关关系。较低的甲基化水平与较高的 mRNA 表达相关。（L） Kaplan-Meier 生存曲线描绘了黑色素瘤患者的无进展生存期，按 qMSP 测量的 cg24157392 甲基化水平高和低分层。与甲基化水平高的患者 （n=33） 相比，甲基化水平低的患者 （n=76） 的无进展生存期显着更长 （p=0.012）。（M）散点图显示，通过 qMSP 测量的 cg24157392 的甲基化水平与靶向甲基化测序之间存在很强的正相关关系（R=0.92，p=7.9e-13），验证了 qMSP 评估该位点甲基化的准确性。（N）散点图显示 BTLA mRNA 表达与 qMSP 测量的 cg03995631 位点甲基化水平之间的负相关关系。 较低的甲基化水平与较高的 mRNA 表达相关。（O） Kaplan-Meier 生存曲线描绘了黑色素瘤患者的无进展生存期，按 qMSP 测量的 cg03995631 甲基化水平高和低分层。与甲基化水平高的患者 （n=24） 相比，甲基化水平低的患者 （n=85） 的无进展生存期显着更长 （p=0.035）。（P）散点图显示 qMSP 测量的 cg03995631 甲基化水平与靶向甲基化测序之间存在很强的正相关关系（R=0.91，p=6.1e−12），验证了 qMSP 评估该位点甲基化的准确性。AUC，曲线下面积;郑州大学第一附属医院法祖;OS，总生存期;qMSP，定量甲基化特异性 PCR;ROC，接收器工作特性。
BTLA 启动子甲基化和 mRNA 表达与接受免疫治疗的黑色素瘤患者临床结果的关联
在 Newell 的研究中，35 名同时接受 ICB 治疗的黑色素瘤患者的治疗前肿瘤标本接受了 RNA-seq 和甲基化分析。9 与 TCGA 数据集一致，Pearson 相关性分析验证了 cg24157392（图 4G，R=−0.83，p=7.8e−10）和 cg03995631（图 4H，R=−0.83，p=7.7e−10）的甲基化水平与 BTLA mRNA 表达呈显著负相关。Newell 的研究对 43 例黑色素瘤患者的肿瘤标本进行了甲基化曲线，基于 cg24157392（0.8643）和 cg03995631（0.8752）中位甲基化值的生存分析表明，位于 BTLA 启动子区域的 cg24157392（图 4I，p=0.022）和 cg03995631（图 4J，p=0.088）的低甲基化水平与 PFS 延长相关。此外，作者还验证了 BTLA mRNA 表达在接受 ICB 治疗的两个独立黑色素瘤队列中的预后价值。在 GSE91061 数据集中的 51 例黑色素瘤患者中，BTLA mRNA 高表达患者在接受 ICB 治疗后无进展生存期显著延长。同样，在 PRJEB23709 的 91 例黑色素瘤患者中，BTLA mRNA 表达高的患者在接受 ICB 治疗后 OS 明显延长。
验证 cg24157392 甲基化与 FAHZZU 队列中免疫治疗反应的关联
研究了接受 FAHZZU 队列 ICB 治疗的转移性黑色素瘤患者 （N=109），以测试BTLA 启动子甲基化作为治疗后疾病进展的预测生物标志物。首先，作者将 FAHZZU 队列中 cg24157392 和 cg03995631 CpG 位点的甲基化水平与 BTLA 的 mRNA 表达相关联。Pearson 相关性分析进一步验证了 cg24157392 （R=−0.31， p<0.0001） 和 cg03995631 （R=−0.34， p=0.00022） 的低甲基化 CpG 位点与 BTLA mRNA 表达升高显着相关（图 4K）作者将 PFS 与通过靶向 cg24157392 和 cg03995631 CpG 位点的 qMSP 测量的预处理样品中的甲基化水平相关联。当作者使用中提供的优化临界值（cg24157392：0.94;cg03995631：0.8）进一步对甲基化数据进行二分时。Kaplan-Meier 生存曲线显示，cg24157392（p=0.012）和 cg03995631（p=0.035）低甲基化的黑色素瘤患者的 PFS 更好（图 4L）。为了进一步验证 qMSP 的准确性，作者将通过靶向亚硫酸氢盐测序测定计算的 cg24157392 和 cg03995631 CpG 位点的甲基化水平与 qMSP 的甲基化水平相关联。Pearson 相关性分析表明，两种定量方法对 cg24157392（R=0.92，p<0.0001）和 cg03995631（R=0.91，p<0.0001）CpG 位点表现出显著的一致性（图 4M）。比较分析表明，对于 cg24157392 位点（p=0.026），良好反应者的甲基化水平显着降低，而对于 cg03995631 位点（p=0.27），良好反应者的甲基化水平往往低于不良反应者的甲基化水平（图 4N）。作者收集了低甲基化组中 15 例在 ICB 治疗前接受其他治疗（如靶向治疗或化疗）的患者的 PFS 数据。采用配对 t 检验比较 ICB 与无 ICB 治疗的 PFS 时间。结果显示，这些患者对 ICB 治疗的 PFS 更长（图 4O，p=0.028）。总体而言，本研究开发的靶向 cg24157392 和 cg03995631 的 qMSP 检测可以准确量化两个 CpG 位点的甲基化水平，并且 cg24157392 和 cg03995631 的低甲基化与 ICB 治疗患者 PFS 延长显著相关。
BTLA 启动子甲基化与 FAHZZU 队列中的蛋白表达和免疫细胞浸润有关
先前的研究表明，BTLA 在 T 细胞上表达。3 CD45RO 是人类记忆 T 细胞的标志物。37 为了确认 BTLA 在黑色素瘤 T 细胞上的表达，对三个黑色素瘤 FFPE 组织切片进行了一组 BTLA 和 CD45RO 多重免疫荧光染色。然后作者观察到 BLTA（黄色信号）和 CD45RO（红色信号）在一些细胞中的共定位（图 5A ），证明 BTLA 在黑色素瘤的 T 淋巴细胞上表达。作者对 FAHZZU 队列中 100 名黑色素瘤患者的肿瘤样本进行了 H&E 染色和 BTLA IHC 染色，并用 H 评分评估了 BTLA 蛋白表达水平。作者发现，低启动子甲基化组的肿瘤具有更多的淋巴细胞浸润（图 5B ）和更高的 H 评分（图 5C，p=0.022）。Pearson 相关分析还显示 BTLA 启动子的甲基化水平与 H 评分之间呈显著负相关（图 5D，R=−0.69，p<0.001），表明 BTLA 启动子的甲基化水平与 BTLA 蛋白水平呈负相关。全身免疫炎症指数（SII）作为全身炎症反应的评价指标，已被证实与预后相关。38 它是使用考虑血液中某些免疫系统标志物水平的公式计算的。 计算公式为血小板×中性粒细胞/淋巴细胞。38 作者计算了 FAHZZU 队列中总共 109 名黑色素瘤患者的 SII 水平，并比较了低甲基化组和高甲基化组之间的差异。作者发现低启动子甲基化组的 SII 较低（图 5E），表明低甲基化组可能对免疫治疗有更好的反应。根据作者在原始研究中提供的 SII 阈值 330,38 将 FAHZZU 队列分为高 SII 组和低 SII 组。作者进一步使用χ2 检验分析了两个 CpG 位点的甲基化组、SII 组和肿瘤分期之间的相关性。作者发现两个 CpG 位点的低 SII 组和低甲基化组之间具有显着的一致性（图 5F）。然而，对于癌症分期，作者观察到 cg24157392 的甲基化组与癌症分期之间存在相关性，而 cg03995631 的甲基化组与癌症分期之间没有发现相关性（图 5G）。低甲基化组中较低的 SII 水平表明 BTLA 低甲基化可能正在驱动免疫细胞流入，而不是免疫细胞流入是炎症过程的结果。
图 5. 验证 BTLA 启动子甲基化与蛋白质表达和免疫细胞浸润的负相关性。（A）BTLA/CD45RO 双荧光免疫染色证实了 BTLA（黄色信号）和 CD45RO（红色信号）在 T 细胞内的共定位。（B）代表性图像显示了组织和细胞切片的 H&E 染色以及高甲基化组和低甲基化组的 BTLA 免疫组织化学（IHC）染色。20×，20 倍原始放大倍率;80×，80 倍原始放大倍率。（C）箱线图显示了低甲基化组和高甲基化组之间 BTLA 阳性细胞组分的差异。Wilcoxon 秩和检验;*p<0.05。（D）IHC 启动子甲基化与 BTLA 阳性细胞组分之间的 Pearson 相关性。（E）箱线图显示了低甲基化组和高甲基化组之间全身免疫炎症指数（SII）的差异。Wilcoxon 秩和单侧检验。（F）维恩图显示了高 SII 组和低 SII 组之间高甲基化组和低甲基化组患者分布（左图：cg24157392;右图：cg03995631）。（G）维恩图还说明了高甲基化组和低甲基化组患者在不同肿瘤分期的分布（左图：cg24157392;右图：cg03995631）。
黑色素瘤中 DNMT3A/3B mRNA 表达升高与 BTLA 启动子甲基化相关
诱导BTLA 启动子甲基化的潜在机制仍然未知。最近的文献强调了 DNA 甲基转移酶，特别是 DNMT3A 和 DNMT3B，在通过 DNA 甲基化调节基因表达中的作用。这些酶通常在各种癌症中过度表达，包括黑色素瘤，39 它们在肿瘤进展和免疫逃避中起着关键作用。为了进一步研究 BTLA 启动子甲基化背后的潜在机制，作者比较了 TCGA 的 366 份转移性 SKCM 样本中高甲基化组和低甲基化组之间 DNMT3A 和 DNMT3B 的 mRNA 表达水平。作者的结果表明，低甲基化组的 DNMT3A 和 DNMT3B 显着下调（ 图 6A）。相关性分析显示，DNMT3A（R=0.2，p<0.0001）和 DNMT3B（R=0.16，p=0.0023）的 mRNA 表达水平与 BTLA 启动子甲基化之间存在显著正相关（ 图 6B）。此外，对于从作者的队列中随机选择的 50 例黑色素瘤病例，作者使用 qPCR 对 DNMT3A 和 DNMT3B 进行了定量基因表达分析。然后将这些基因的表达水平与 BTLA 启动子的甲基化状态相关。结果显示，DNMT3B 表达与 BTLA 启动子甲基化呈显著正相关（R=0.44，p=0.0015）。尽管在 DNMT3A 表达和 BTLA 启动子甲基化之间没有发现显着相关性，但仍观察到轻微的相关性（R = 0.25，p = 0.086）（ 图 6C）。这些发现表明，DNA 甲基转移酶基因 DNMT3A 和 DNMT3B 的高表达可能诱导 BTLA 启动子甲基化增加，有助于黑色素瘤的免疫逃逸，这可以解释高甲基化组生存期较短的原因。
图 6.BTLA 启动子甲基化与 DNMT3A/B 基因表达的正相关关系。（A）箱线图显示了 366 例 TCGA 转移性黑色素瘤中高启动子甲基化组和低启动子甲基化组之间 DNMT3A/B 的基因表达差异。（B）366 例 TCGA 转移性黑色素瘤中 BTLA 启动子甲基化水平与 DNMT3A/B 基因表达水平之间的 Pearson 相关性。（C）来自作者 FAHZZU 队列的 50 例转移性黑色素瘤中 BTLA 启动子甲基化水平 （qMSP） 和 DNMT3A/B 基因表达水平 （qPCR） 之间的 Pearson 相关性。郑州大学第一附属医院法祖;qMSP，定量甲基化特异性 PCR;qPCR，定量 PCR;TCGA，癌症基因组图谱。采用 Wilcoxon 秩和检验比较两组的所有统计学差异;p<0.0001。
总结
总之，作者的研究将 BTLA 启动子低甲基化确立为黑色素瘤良好预后和增强免疫治疗反应的重要生物标志物。BTLA 启动子甲基化、mRNA 和蛋白质表达、免疫细胞浸润和临床结果之间的相关性强调了表观遗传调控在塑造肿瘤-免疫相互作用中的重要性。通过将 BTLA 启动子甲基化分析整合到临床实践中，作者可以改善患者分层并优化免疫治疗策略，最终推动精准肿瘤学领域的发展。未来的研究应继续探索 BTLA 调节的机制基础及其对癌症免疫治疗的更广泛影响。
|
