一、心内膜心肌活检病理切片
1、应用及意义
1962年心脏活检导管被发明，并应用心导管进行心内膜心肌活检（endomyocardial biopsy，EMB），随后几经改进，目前EMB已成为心脏较为安全简便的检查技术。其特点是能直接通过活检取得心肌组织做病理检查，对心肌疾病的诊断能提供无创伤性检查所不能提供的有诊断价值的资料，而且还可以对病程经过作动态观察，有利于指导治疗和判断预后。国内自1981年以来已广泛开展此项工作。由于心肌活检可以造成一定的心肌损伤，属于创伤性检查，故应严格掌握适应证。虽然右心活检的并发症和危险性较少，但也可发生右心室压力或容量负荷的增加，累及心肌。如病变心肌主要累及左心室时，则应采用左心活检。左心活检的指征常为病变累及左心室的某些心内膜心肌发生纤维化如硬皮病的心肌损害、左心放射性损伤、婴幼儿的心内膜弹力纤维增生症、左房室瓣和主动脉瓣病变所致的左心室功能障碍和各种形式的心肌肥厚等。此时一般不采取心房壁或右心室游离壁，因为这部分的心室壁较薄，取材时有引起穿孔的危险性。
2、EMB的适应证
监测心脏移植后的排斥反应：对排斥反应的病变程度进行分级，随访病程演变及预后情况。
监测药物性心肌损伤：如抗肿瘤药物（蒽环类或阿霉素）导致的心肌病变，通过活检确诊和分级，指导临床用药。
确诊特殊形态学改变的心内膜心肌病变：包括心内膜心肌纤维化、心内膜弹力纤维增生症、心肌淀粉样变、心肌结节病等。
协助诊断原发性心肌病和缩窄性心包炎：提供病理学依据，进一步明确病因。
帮助或随访心肌病的诊断：动态观察心肌病的进展及治疗效果。
诊断或随诊继发性心肌病：如贮积性疾病（如糖原贮积症、血色病等）。
诊断心肌原发或继发性肿瘤：明确肿瘤性质（如心脏横纹肌瘤、转移性肿瘤等）。
辅助诊断特发性心肌病、胸痛和/或心律失常：通过病理检查排除或确认特定病因。
科研应用：对活检组织进行生化、组织化学、形态学、药理学、免疫学和病原学等研究。
3、制片过程
活检组织病理标本经10%中性缓冲福尔马林甲醛固定，用滤纸包好，编号。
80%乙醇脱水10min。
95%乙醇脱水Ⅰ～Ⅲ，各10min。
无水乙醇脱水Ⅰ～Ⅲ，各10min。
二甲苯透明Ⅰ～Ⅱ，各10min。
56～58℃石蜡浸蜡10min。
58～60℃石蜡浸蜡15min。
连续石蜡切片4～5μm：每个组织块要切6张切片（每个切片至少需3个组织面），分别将第1、3、5号切片做HE染色。
将第2、4、6号切片分别做马森三色染色、PTAH染色、弹力纤维+VG染色
早期心肌缺血的改变（HE*20）
心脏移植后慢性排斥反应-心肌纤维化（马森染色*5）
心脏移植后慢性排斥反应-心肌纤维化（PTAH染色*10）
心脏移植后慢性排斥反应-心肌纤维化（弹力纤维+VG染色*5）
二、脑组织（癫痫）标本病理切片制作技术
1、应用及意义
癫痫患者经过正规抗癫痫药物治疗，仍有20%～30%为药物难治性癫痫，癫痫的外科手术治疗为这部分患者提供了一种新的治疗手段。如颞叶癫痫伴海马硬化，若定位准确手术的有效率可达60%～90%。婴幼儿或儿童的灾难性癫痫如拉斯马森综合征可严重影响大脑的发育，应积极手术，越早越好。如皮质发育畸形、良性低级别肿瘤、海绵状血管瘤、动静脉畸形、半身惊厥-偏瘫-癫痫综合征等均是手术治疗的适应证。估计约有50%的药物难治性癫痫患者可通过手术使发作得到控制或治愈，一定程度上改善难治性癫痫的预后，而病理分型则能更好地指导临床治疗，进一步改善患者的生活质量，因此规范的病理取材、脱水、制片极为重要。
2、脑组织取材
手术标本离体后不经任何处理，立即由专人负责将标本放入4℃冰盒送往病理科。病理技师核对送检标本与送检单准确无误后接收标本、分配病理号，取材医师立即取材。
取材医师做好送检脑组织大体描述，记录员做好记录，并进行大体标本拍照，着重对脑组织外观的特殊部位（如热灼、缺损等）进行拍照，将拍摄好的图片放在电脑专用癫痫文件夹内，做好编号及备份。
取材医师按一定顺序垂直于脑表面切开标本，标本厚度以5mm为宜，组织不宜太薄，否则在脱水过程中容易发生收缩卷曲，造成包埋困难，导致切片不完整或者出现碎裂现象；也不可取材太厚，否则会造成组织固定、脱水、透明、浸蜡不彻底，后期切片困难，染色时组织也非常容易发生脱片。取材医师做好每个切面描述，记录员记录并对剖开切面进行拍照，记录每个切面真实状况
选取小部分典型病变组织放入液氮中速冻10min，然后将其放入冻存管内，并置于-80℃低温冰箱冻存，以备今后研究。
3、脑组织固定
脑组织癫痫标本常规检查常选用10%中性缓冲福尔马林作为固定液，固定液的量为组织体积5～10倍。大部分癫痫标本基本与正常脑组织趋于相似，含水分及脂类较多，固定液不易渗透，短时间难以固定充分，所以常规标本的固定时间不能满足癫痫标本的固定。取材5mm厚的癫痫标本至少需要48h才能充分固定，3mm厚的脑组织癫痫标本固定24h即可。
脑组织含水分及脂类较多，在固定后和脱水前需进行前期脱水及脱脂处理。首先将样本浸入70%乙醇2h进行前期脱水，之后将样本浸入甲醇与氯仿1:1比例配制的混合液中放置24h进行脱脂处理，前期处理完成后再将组织标本放入脱水机中脱水。
4、脑组织包埋、切片及染色
包埋：脑组织经脱水处理后质地较脆，包埋不宜过度挤压以免组织碎裂，造成人为裂隙或缺损。包埋时首先取出合适大小的包埋盒，按原取材面将组织平移到包埋盒内，水平放置组织进行包埋，包埋时切不可随意翻转组织方向。
组织切片：（1）脑组织经脱水处理后质地较脆，切片时冷台温度设定不宜过低，否则因温度过低，切片易发生碎裂及不完整。（2）脑组织切片时进刀距离要小，下刀速度要慢，细修时卷片要慢，动作平稳，卷片次数要充足，防止切片出现人为的脑组织变形失真。（3）脑组织切片厚度以5μm为宜，因脑组织细胞较少，神经元体积较大，在切片较薄时，如气球样细胞等特殊的诊断标志不能被很好的观察到，只有在切片较厚时才能更准确地反映相关病变。（4）脑组织切片时携带的组织周边容易形成一些细小皱褶，如果不注意，制成病理切片镜下会看到许多皱褶。所以切片时将切好的蜡带先放入30%乙醇中初展，再缓慢将蜡带移入展片仪中，以免切片放入水中过快而使切片产生气泡；展片仪的温度可以设定为48℃，比常规组织展片高的水温可以把脑组织周边细微褶皱充分展开，捞片时要观察组织切片完全平展后再捞片，防止因为有气泡或未展平面造成折叠或气泡印迹；捞好的切片充分晾干水分后再放入70℃恒温烤箱或烤片台上烤片，烤片时间设定20min。
癫痫手术切除的脑组织切片（HE染色*100）
A：送检海马组织；
B：垂直于海马的长轴和/或侧脑室壁，每隔3~5 mm沿冠状面依次切开；
C：海马组织未见神经元缺失；
D：图C的Neun染色；
E：CA1区神经元重度缺失，CA3及CA4区神经元中度缺失；
F：图E的Neun染色。
（不妥之处，敬请批评指正）
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