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比较两组尿控制（n = 86）和尿失禁（n = 49）的病理数据。两组年龄（P = 0.008）和体重指数（BMI）（P = 0.017）差异有统计学意义。具体而言，尿失禁患者的年龄和 BMI 均大于无尿失禁患者。此外，尿失禁组的前列腺体积明显大于泌尿对照组（P = 0.004）。此外，尿失禁组接受经尿道前列腺手术的患者比例较高（P = 0.002），而保留最大尿道长度保留（MULP）（P = 0.015）并维持完整膀胱颈的患者比例较低（P = 0.028）。两组的格里森评分（P = 0.209）、术前前列腺特异性抗原（PSA）水平（P = 0.561）、高血压（P = 0.663）和肿瘤分期（P = 0.172）差异无统计学意义。这些发现表明，年龄、BMI、术前前列腺体积、经尿道前列腺手术史、MULP 保留和膀胱颈完全保留可能是与术后尿失禁相关的重要因素。
miR-330-3p 在前列腺切除术后患者的表达及其对 PPUI 的预测价值
在接受前列腺癌手术的患者中，与泌尿对照组相比，尿失禁患者的血清 miR-330-3p 降低（P<0.001,95%CI = 0.42 − 0.25）（图 1a）。ROC 分析显示，miR-330-3p 的低表达能有效区分尿失禁患者和泌尿控制患者。ROC 曲线的 AUC 为 0.853（95%CI = 0.79–0.92），灵敏度和特异性分别为 75.5%和 81.4%（图 1b），表明 miR-330-3p 可以作为识别 PPUI 患者的可靠生物标志物。
miR-330-3p 在前列腺切除术后患者的表达及其对 PPUI 的预测价值。p<0.001。miR-330-3p 在尿失禁组（n = 86）和尿失禁患者（n = 49）中的表达（a）。miR-330-3p 预测 PPUI 的 ROC 曲线（b）
miR-330-3p 可能是 PPUI 的危险因素
分析了 PPUI 患者 miR-330-3p 表达与各种病理特征之间的相关性。根据 miR-330-3p 的平均水平，将 PPUI 患者分为低表达组（n = 26）和高表达组（n = 23）。miR-330-3p 表达与年龄（P = 0.011）、BMI（P = 0.017）、术前前列腺体积、经尿道前列腺手术史（P = 0.016）、MULP（P = 0.044）和完全保留膀胱颈（P = 0.032）之间存在显着相关性。这些结果凸显了 miR-330-3p 作为与该患者群体中特定病理特征相关的生物标志物的潜在作用。此外，logistic 回归分析显示，miR-330-3p 可能是前列腺癌患者根治性手术后尿失禁的危险因素（OR = 0.054,95%CI = 0.017–0.170，P<0.001）（图 2）。
前列腺癌患者术后尿失禁危险因素的 Logistic 回归分析
尿失禁患者 MMP2 的表达上调（P<0.001,95%CI = 0.49–0.63）（图 3a），这些患者的 MMP2 和 miR-330-3p 水平呈负相关（r= -0.7431，P<0.001,95%CI= -0.85 至-0.58）（图 3b）。利用 starBase 数据库预测 miR-330-3p 与 MMP2 的结合位点，并通过双荧光素酶报告基因实验进一步验证。具体而言，miR-330-3p 模拟物显著降低了 wt-MMP2 的荧光素酶活性（P<0.01,95%CI = 0.15–0.72），而 miR-330-3p 抑制剂显著提高了其活性（P<0.001,95%CI= -0.81 至-0.24）（图 3c）。此外，还通过 RT-qPCR 分析证实了 miR-330-3p 和 MMP2 之间的相互作用。miR-330-3p 的过表达导致细胞中内源性 MMP2 表达水平降低（P<0.001,95%CI = 0.18–0.63），与 MMP2 过表达载体共转染绕过了这种抑制作用，导致 MMP2 水平升高（P<0.01,95%CI= -0.53 至-0.09）（图 3 d）。
MMP2 可作为 miR-330-3p 的靶基因。p<0.001， **p<0.01.每组实验一式三份进行。MMP2 在尿失禁组（n = 86）和尿失禁患者（n = 49）中的表达（a）。PPUI 患者 miR-330-3p 和 MMP2 表达水平之间的相关性 （b）。采用双荧光素酶报告基因检测（c）验证 miR-330-3p 与 MMP2 的关系。采用 RT-qPCR 验证 miR-330-3p 与 MMP2 的关系（d）
MMP2 过表达抵消了 miR-330-3p 对 HUFs 增殖、炎症和细胞外基质（ECM）重塑的影响
结果表明，用 IL-1β 处理 HUFs 可显着降低 miR-330-3p 表达水平 （P<0.01,95%CI = 0.22–0.69）。此外，用 miR-330-3p 模拟物转染导致其表达水平显着恢复（P<0.01,95%CI = -0.57 至-0.10）（图 4 a）。相反，IL-1β干预 HUFs 后，MMP2 表达水平显著上调（P<0.001,95%CI=-1.20–0.52）。用 miR-330-3p 模拟物转染导致 MMP2 水平显着降低（P<0.001,95%CI = 0.48–1.16）。MMP2 的过表达抵消了 miR-330-3p 模拟物对 MMP2 表达的抑制影响（P<0.001,95%CI= -0.93 至-0.25）（图 4 b）。IL-1β干预后，HUFs 增殖显著增强（P<0.001,95%CI = 0.32–0.58），miR-330-3p 过表达减弱 IL-1β诱导的 HUFs 增殖增加（P<0.001,95%CI= -0.40 至-0.14）（图 4c）。IL-1β显著增加 HUFs 中炎症因子的浓度，TNF-α（P<0.001,95%CI=-46.41–20.00）、IL-6（P<0.001,95%CI=-74.04-47.63）和 IL-1β（P<0.001,95%CI=-65.82–39.40）水平升高证明了这一点。然而，miR-330-3p 模拟物减弱了炎症因子浓度的增加 （TNF-α： P<0.001， 95%CI = 11.28–37.69;IL-1β：P<0.001,95%CI = 37.35–63.76;IL-6：P<0.001,95%CI = 28.83–55.24）（图 4 d）。IL-1β处理 HUFs 后，ECM 重塑标志物蛋白表达发生显著变化。具体而言，MMP2 水平 （P<0.001,95%CI= -0.89 至 -0.58）和 MMP9（P<0.001,95%CI= -0.79 至-0.48）显著增强，而 TIMP1 的蛋白表达降低（P<0.001,95%CI = 0.40–0.72）。转染 miR-330-3p 模拟物导致 MMP2（P<0.001,95%CI = 0.41–0.72）和 MMP9（P<0.001,95%CI = 0.40–0.71）的蛋白水平降低，以及 TIMP1 蛋白水平升高（P<0.001,95%CI= -0.56 至-0.26）（图 4 e）。然而，MMP2 的过表达抵消了 miR-330-3p 模拟物对细胞增殖（P<0.001,95%CI = 0.16–0.42）、炎症因子分泌（TNF-α的抑制作用：P<0.01,95%CI= -32.73 至-6.31;IL-1β：P<0.001,95%CI= -47.12 至 -20.71;IL-6：P<0.001,95%CI= -44.43 至 -18.01）和 ECM 重塑（MMP2：P<0.001,95%CI= -0.67 至 -0.36;MMP9：P<0.001,95%CI= -0.59 至-0.27;IL-6：P<0.001,95%CI = 0.18–0.49）（图 4c 和 e）。
MMP2 的过表达抵消了 miR-330-3p 模拟物对 HUFs 增殖、炎症和 ECM 重塑的抑制作用。p<0.001， **p<0.01.每组实验一式三份进行。miR-330-3p 模拟物转染的 HUF 中 miR-330-3p 的表达（a）。用 miR-330-3p 模拟物和 oe-MMP2 转染的 HUF 中 MMP2 的表达（b）。MMP2 的过表达抵消了 miR-330-3p 对 HUFs 增殖（c）、炎症（d）和 ECM 重塑（e）的影响。
总结
综上所述，PPUI 患者 miR-330-3p 表达水平显著降低。这表明 miR-330-3p 可能在 PPUI 的发病机制中发挥重要作用。miR-330-3p 的低表达水平与 PPUI 的发生相关，表明 miR-330-3p 可能成为预测 PPUI 风险的重要生物标志物。miR-330-3p 的过表达显着减少了过度的细胞增殖，这通常与炎症反应密切相关。miR-330-3p 还减少了炎症因子的释放，从而降低了炎症反应的严重程度。此外，miR-330-3p 的过表达抑制了 ECM 的过度降解，这被认为是导致组织结构破坏和功能损害的关键因素之一。MMP2 的过表达抵消了 miR-330-3p 带来的保护作用。这一发现不仅揭示了 miR-330-3p 与 MMP2 之间的相互作用关系，也为进一步制定 PPUI 的治疗策略提供了理论依据。在临床上，这凸显了 miR-330-3p 作为潜在的治疗靶点——恢复 miR-330-3p 表达或抑制 MMP2 活性的策略可能为 PPUI 预防或治疗提供新的方法。
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