SOP是指明确如何实施测试或活动流程（一般在试验方案或测试指南中没有详细描述）的文件[1]。一份严谨的常规石蜡切片标准操作程序（SOP），是病理实验室质量与效率的核心支柱。作为病理技师，我深知其重要性，它确保每位操作者严格遵循统一、可验证的流程。以下分享编写关键要素与内容：
广东省结核病防治宣传员
病理主管技师 陈稳
常规病理切片是指组织块固定、脱水、浸蜡、包埋、切片、染色的全过程，由于环节多，极易出现差错，因此应特别注意质控和核对。制片应参照相应的技术规范，以保证切片质量。
规范常规制片的操作流程，控制常规制片质量。
组织进行常规固定、脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、切片、摊片、贴片、烤片、苏木精-伊红染色（HE染色）和封片等一系列操作技术，称为常规HE制片技术，这是各种病理技术的基础。
图1 脱水槽观察密封圈检查
图2 石蜡不足
图3 加注石蜡到下限线
图4 工作日脱水工作程序
3.检查起止时间，根据全流程系统统计的标本盒数填写脱水盒数（图4）。
4.观察脱水机是否将固定液完全抽入脱水槽。
图5 包埋中心蜡缸中
6.从烤箱取出已烤好的备用脱水篮，放入脱水槽中（图6），关闭脱水槽，启动自动清洗程序。待清洗结束后，检查并擦拭脱水槽，取出脱水篮备用取材。
图6 脱水篮放入脱水槽中一起清洗
（二）组织包埋
1.打开全流程系统一体机，登录包埋技师账号，打开或自动定时启动包埋中心和冷冻台；打开工作灯，调节石蜡流量开关，预热包埋框及镊子。
2.选择合适的包埋模具，包一个开一个包埋盒，扫描一个（图7），禁止批量开盖、批量扫描包埋。先加入少量的蜡，用热镊子夹取组织块（图8），使病灶或指定面向下埋入蜡中，并用镊子轻轻按压，移到冷冻台。待包埋模具底下石蜡凝固，不能移动组织（图9），后加上该组织的包埋盒，再加注合适的蜡（图10），将其移入冷冻台上使其加速凝固（图11）。
2.1非息肉内镜小组织包埋方法，窄面包埋法和颜色分辨辅助法[2]，将组织的蒂部或者凹陷朝向四周包埋。
2.2带有黏膜肌的组织黏膜面与蜡块呈垂直方向包埋。
2.3薄片组织包埋时应竖起来包埋。
2.4管状组织（以输卵管、阑尾、血管等），要使切面为横截面，切面朝下包埋。
图7 包埋盒扫描
图8 第一次加蜡
图9 石蜡凝固不能移动组织
图10 第二次加蜡
图11 入冷冻台
3.待全部包埋结束后，将蜡块从包埋框中取出，烫削修整蜡块边缘多余的石蜡，按序号排列，并与取材单逐一核对，数据准确后放入冰盒，置于冰箱冷冻层。
4.关闭流量开关及包埋工作灯，清理包埋机上剩余的残蜡（图12、13），将脱水篮放入烤箱内烘烤备用。
图12 利用包埋机平台烫削
图13 利用修蜡仪器烫削
5.将包埋模具按大小规格整理排列好，备用。
6.检查包埋机溶蜡槽中的石蜡量，并及时添加。
（三）石蜡切片
2.将已经扫描打好玻片标签的组织蜡块放在切片机的样品夹头内夹紧，如有未烫削干净的，重新烫削（图14、15、16、17、18）。
图14 扫描蜡块
图15 玻片打号机自动打印玻片
图16 扫描蜡块
图18 重新烫削
图19 统一标准切削平面
图20 样品头不在同一标准切削平面
4.调节切片厚度指示器至切片所需的厚度，一般切4μm。，另外需要根据不同类型的组织调节切片的厚度，如淋巴结、鼻咽等组织可切2～3μm厚，脂肪等组织可切5～8μm厚。
5.调节刀座的位置，避免样品夹头过度伸缩（图19）。刀座的位置调节好后，一般不需每次切片前调节。
6.切片刀的切片角度调节好后，一般不需每次切片前调节，除非更换不同厚度的切片刀或一次性刀片的刀架。
7.打开切片手轮的固定锁（轮转切片机的切片手轮都装有固定锁，锁上后切片手轮不能转动，样品夹头也就不能上下移动）。如果切片不熟练，在将组织蜡块放在切片机的样品夹头均夹紧时，需要锁上切片手轮，避免样品夹头向下移动时手碰到切片刀而割伤手。
8.修切组织蜡块和切片左手按方向键，使组织蜡块前进或后缩快速接近刀锋，同时右手转动切片手轮使组织蜡块上下移动来修切蜡块，直到修切出完整、接近最大的组织面。再连续多次转动切片手轮切片，使组织面平滑而不会出现切面有筛洞现象，然后才开始切片。切片时转动切片手轮动作要轻，用力均匀。如需要连续切片则用毛笔轻轻托起第一张组织蜡片的一端，另一端仍然紧贴在刀锋上，连续转动切片手轮切出续切片，镊子即可拖出一条连续的组织蜡片带。
9.胃镜、纤支镜等小活检组织切片必须作连续性切片，数量不得少于6个/张玻片（图21）。
图21 6个组织/张玻片
（四）摊片、贴片、烤片
1.用小弯镊或松软的毛笔把组织蜡片（光面向下）轻轻移入室温水或5%～10%的乙醇内。
2.如果组织蜡片有皱褶，用小弯镊的弯部把皱褶打开，如果组织蜡片有气泡，将小弯镊伸入水中，用镊尖把蜡片下的气泡赶走。
3.用玻片把无皱褶和无气泡的蜡片移到摊片机的恒温50度水中，直至蜡片展平，将蜡片贴在玻片合适的位置，用接近于水平90°的角度贴住蜡片缓慢拉起，尽可能排干蜡片与玻片间水分，捞出全部蜡片后要尽可能沥干（图22）。
图22 与水平90°的角度贴住蜡片缓慢拉起
4.将贴好片的玻片按顺序放在烤片机上烤片。
5.贴片后切片放满一架，马上放入60~65℃烤箱中烤片20～30分钟，使蜡片水分蒸发和石蜡熔化，组织切片牢固贴在玻片上，取出迅速可进行染色。
（五）染色机苏木素-伊红染色
试剂定期更换，每周一进行试剂验证并登记，合格后方可进行染色（图23、24）。染色机流程如下：
1.脱蜡剂Ⅰ 10分钟；
2.脱蜡剂Ⅱ 10分钟；
3.无水酒精Ⅰ 2分钟；
4.无水酒精Ⅱ 1分钟；
5.95%酒精Ⅰ 2分钟；
6.95%酒精Ⅱ 30秒；
7.80%酒精 30秒；
8.自来水 1分钟；
9.苏木精染液 8分钟；
10.自来水冲洗 30秒；
11.0.5%盐酸酒精溶液分化 5秒钟；
12.流水冲洗 8分钟；
13.伊红染色液染 1分钟；
14.自来水洗 25秒；
15.80%酒精 20秒；
16.95%酒精 10秒；
17.无水酒精Ⅰ 3分钟；
18.无水酒精Ⅱ 3分钟；
19.无水酒精Ⅲ 3分钟；
20.脱蜡剂Ⅰ 5分钟；
图 23试剂更换记录
图24 试剂验证记录
（六）封片
人工封片时要在通风柜中进行，不得有气泡，不得有树胶溢出。核对切片与蜡块是否一致。无误后交给初诊医生并且核对片数。
（一）制片要求
1.有针对不同组织（如小活检、骨组织、淋巴结等）优化的制片、染色流程，以保证切片质量；
2.组织包埋、切片及染色后，要对蜡块、切片、取材工作记录三相核对，以保证不出差错；
3.制片过程中如出现异常，应立即与有关的病理医师联系，并报告科主任，查清事实，采取相应的补救措施；
4.内镜小活检、穿刺等需连续切片6～8片以上。
5.大标本常规制片要求48小时内完成，内镜等小活检标本制片要求24小时内完成。
（二）评分标准：分值≥90分为优良切片。
1.核浆分明、红蓝适度，伊红染色有层次；苏木素染色能明确分辨染色质，满足诊断需要：60分。
2.切片完整、厚度均匀：：10分。
3.无皱褶、无折叠、刀痕、颤痕、裂隙：：10分。
4.无溢液、无污染：10分。
5.标签清晰、规范：10分。
6.以上各项符合要求者得满分，不符合要求者得0分。<90分为不及格。
7.注意事项：标签病理号标识错误（张冠李戴）者一票否决，总分为0分。如有标签标识错误者，必须有审核程序方可更正，需对更正过程进行记录。一个蜡块，一个病理编号（以病理号后面的小号区别），对应一张HE切片。
8.每天切片人员抽查自己的切片30张，按评分标准自评并将结果登记入系统。
（一）制片过程发现不合格切片/标本/蜡块。
（二）向上一制作流程（步骤）相关人员反映情况。
（三）查检失控原因。
（四）当场整改：重取、重新制片。
（五）登记在案。
（六）分管质控副主任利用QCC、PDCA等手段对失控原因分析。
（七）实施整改。
（八）标准作业。（图25）
图25 QCC部分标准作业
（一）内镜小活检、穿刺等需连续切片6～8片以上。
（二）大标本常规制片要求48小时内完成，内镜等小活检标本制片要求24小时内完成。
（三）定期参加省级以上质控中心等机构的室间质控。（图26）
图26 国家级室间质控证书
略。
（一）病理切片质量失控处理流程
（二）常规病理制片流程图
（三）不同组织类型制片流程图
一份精炼、无歧义的SOP，是技术传承与标准化的基石。它通过规范操作、强化质控、明确责任，为病理诊断提供稳定可靠的技术保障，是病理技师专业价值的直接体现。SOP不仅约束流程，更释放精准——它将经验沉淀为可复制的标准，让每一张切片都承载着诊断的基石。但是，每个实验室sop文件各有不同，要根据本实验室实际情况编制，可以肯定的是没有完美的版本，每年均需要与时俱进重新修订新版本，重新审核和发布执行的，是一个持续改进的过程。
[1]OECD. OECD Series on Principles of Good Laboratory Practice and Compliance Monitoring： No. 1： OECD Principles of Good Laboratory Practice (As Revised in 1997) [EB/OL]. (2017-07-27)[2022-04-02].
[2]王德田，董建强．实用现代病理学技术［M］．北京：中国协和医科大学出版社，2012：39－45．
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编辑：小约翰