导语

 
结果:

Diagnostics (Basel) |成功从基于膜收集的女性生殖分泌物中提取人乳头瘤病毒DNA——在通用运输介质中长期储存后
3.1. 研究人群选择
总体 HIV 患病率为 9.1%[95%置信区间(CI):6.3–11.9%]。使用参考 Papilloplex® 检测方法检测到的任何 HPV 和 HR-HPV 感染的总体患病率分别为 92.7%和 36.9%。HR-HPV 的总体患病率为 36.9%[95% CI:32.3–41.5%],在 HIV 阳性 FSW(性工作者)中高于未感染者(p < 0.001)( Figure 1 )。检测到的最普遍的 HR-HPV 为 HPV-52(16.6%)和 HPV-58(11.1%)。HPV-16、HPV-18 和 HPV-45 在 FSW 中分别仅占 6.7%、3.1%和 4.8%,因此 63.4%的 HR-HPV 将被 Gardasil-9 ® 疫苗覆盖。

在刚果民主共和国 Kisangani 居住的 415 名成年女性性工作者中,使用 Papilloplex® HR-HPV DNA Kit(GeneFirst Ltd., Abingdon, UK)对 HPV 分子检测阳性的遮蔽法收集的生殖样本中,高危 HPV(HR-HPV)按 HIV 状态的分布。
30 名 HPV 阳性性工作者平均年龄为 25.7 岁(范围:18-37 岁),而 30 名 HPV 阴性对照组平均年龄为 36.9 岁(范围:23-44 岁)。
3.2. 存储 27 个月后 HPV 检测和基因型
在所有存储温度下,测得的 DNA 产量没有显著差异。根据 BMRT 人乳头瘤病毒基因分型实时荧光 PCR 试剂盒,所有来自 HPV 阴性对照组的样本在所有存储温度下均为阴性。
描述了在 30 名选定的 HPV 阳性 FSW 中,三种储存温度下检测到的 HPV 基因型。在−30 °C、+4 °C 和+25 °C 的储存温度下,本研究参与者中分别检测到 100、98 和 95 种不同的 HPV,使用 BMRT 人乳头瘤病毒基因分型实时荧光 PCR 试剂盒。在参考储存温度−30 °C 下,最常检测到的 HPV 基因型为 HR-HPV-52 和潜在致癌性 HPV-53(均为 14.0%),其次是潜在致癌性 HPV-66(11.0%)和 HR-HPV-58(10.0%)。这表明随机分配具有良好代表性。此外,69.7%的 HR-HPV 将被 Gardasil-9® 疫苗覆盖。在三种储存温度下,HPV DNA 检测的流行率和检测到的 HPV 基因型相似。
3.3. 存储 27 个月后 HPV 病毒载量和 TOP3 基因检测
Figure 2 描绘了在三种储存温度下检测到的 HPV 病毒平均累积负荷,以每 10,000 个细胞中的对数拷贝数表示,包括所有 HPV、HR-HPV、PO-HPV、LR-HPV,以及由九价 Gardasil-9 ® 疫苗覆盖的 HPV 类型,组间和储存温度无显著差异(所有 HPV:在−30 °C 时为 18.8 ± 9.7,在+4 °C 时为 18.3 ± 8.8,在+25 °C 时为 18.0 ± 8.7;HR-HPV:在−30 °C 时为 12.5 ± 8.9,在+4 °C 时为 12.4 ± 8.5,在+25 °C 时为 12.4 ± 9.0;PO-HPV:在−30 °C 时为 6.7 ± 1.9,在+4 °C 时为 6.6 ± 1.8,在+25 °C 时为 6.5 ± 2.1;LR-HPV:在−30 °C 时为 5.9 ± 0.7,在+4 °C 时为 5.8 ± 0.8,在+25 °C 时为 6.1 ± 0.8;疫苗靶向 HPV:在−30 °C 时为 10.8 ± 6.8,在+4 °C 时为 10.6 ± 7.0,在+25 °C 时为 9.5 ± 6.5;所有比较均无统计学差异;p > 0.05)。

箱线图展示了 30 例在纳入时检测为阳性、基于面纱自采集的生殖道样本中,任何 HPV、高危 HPV、低危 HPV、普通型 HPV 和 Gardasil-9 疫苗 HPV 的累积病毒载量,以每 10,000 个细胞中的对数拷贝数表示,采用 BMRT 人乳头瘤病毒分型实时荧光 PCR 试剂盒(江苏贝博生物科技有限公司)进行检测。这些样本使用 Papilloplex® 高危 HPV 和 Papilloplex ® 低危 HPV(GeneFirst 有限公司)作为参考检测方法进行确定,样本在 Cyt-All ® 通用运输介质(Alphapath)中于-30°C、+4°C 和室温(+25°C)条件下储存了 27 个月。每个箱线图从第一四分位数绘制到第三四分位数,并在其中绘制一条水平线表示中位数。
TOP3 基因在所有样本中均被检测到。Figure 3 显示了在三种储存温度下,通过 Ct 值评估的 TOP3 基因的估计数量。+4°C(29.0 ± 5.4)和+25°C(29.3 ± 5.4)的平均 Ct 值高于−30°C(27.4 ± 5.4)(p < 0.001 和 p < 0.003,分别)。

箱线图展示了 BMRT 人乳头瘤病毒分型实时荧光定量 PCR 试剂盒(江苏博美特斯科技有限公司)检测的泛在单拷贝人基因 TOP3(编码 DNA 拓扑异构酶 III)的估计数量,以循环阈值(Ct)任意单位表示。这些数据来自 30 例在纳入时检测为阳性的基于面纱的自采集生殖道样本,使用 Papilloplex® 高危 HPV 和 Papilloplex ® 低危 HPV(GeneFirst 有限公司)作为参考检测方法进行确定。样本在 Cyt-All ® 通用运输介质(Alphapath)中分别以−30 °C、+4 °C 和室温(+25 °C)条件下储存了 27 个月。每个箱线图从第一四分位数到第三四分位数绘制,内部水平线表示中位数。
3.4. 参考分子检测立即 HPV 检测与储存 27 个月后的延迟检测的一致性
使用 BMRT 人乳头瘤病毒分型实时荧光 PCR 试剂盒检测在 Cyt-All® 通用运输介质中储存的基于棉签自采集的阴道分泌物样本中任何 HPV 和 HR-HPV 的延迟检测,在所有储存温度下均显示出高灵敏度和准确性,任何 HPV 的检出率范围为 92.2%至 97.1%,HR-HPV 的检出率范围为 89.4%至 96.9%.
即时检测与延迟检测方法在检测任何 HPV 和 HR-HPV 方面的百分比一致性分别在 93.9%至 97.7%和 92.7%至 97.9%之间。Cohen’s κ系数对于任何 HPV 在 0.84 至 0.94 之间,对于 HR-HPV 在 0.84 至 0.95 之间,表明即时检测与延迟检测方法在检测任何 HPV 和 HR-HPV 方面具有“几乎完美”的一致性,

总结

使用 Cyt-All® 通用运输介质的主要优势在于,宫颈样本可以在室温下安全保存,无需大型基础设施和资源成本。基于屏障的自采集女性生殖分泌物样本在通用运输介质上,可以成为可靠且经济的方法,用于构建大型生物库,进行 HPV DNA 分子检测,为因经济和文化原因难以获得医疗保健的女性筛查 HPV 感染。对于高风险患者肛门癌的筛查,也可以提议使用 Cyt-All ® 通用运输介质保存自采集的肛门样本。实际上,与用于宫颈癌筛查的自采集生殖分泌物[ 41 ]类似,即使在撒哈拉以南非洲[ 11 , 23 ],自采集的肛门样本也可能对接触医疗保健系统外的患者[ 42 ]具有吸引力