微精选

作       者：鞠爱萍，孟祥荣，覃燕龄，古玉莹

作者单位：广州市花都区妇幼保健院检验科

作者简介：鞠爱萍，主要从事分子诊断相关研究。

通信作者：古玉莹，E-mail: [email protected]

基金项目：广州市花都区医疗卫生一般科研专项项目（23-HDWS-069，24-HDWS-071）；广州市花都区胡忠医院院内科研立项项目（2024001）

目的  探讨无创产前检测（non-invasive prenatal testing，NIPT）在筛查胎儿染色体拷贝数变异(copy number variations，CNVs)中的应用价值。方法  对196例经NIPT显示高风险的样本进行回顾性分析，比对染色体核型分析或染色体微阵列分析（chromosomal microarray analysis，CMA）结果。根据NIPT筛查胎儿CNVs的阳性率、阳性预测值（positive predictive value，PPV）等临床数据，评估NIPT对胎儿CNVs的检测价值。结果  共检测NIPT样本20 378例，在196例高风险样本中，包含54例CNVs，筛查阳性率为0.265%；46例孕妇接受了介入性产前诊断，21例确诊为CNVs，其中13例为致病性变异，3例为可能致病性变异，5例为意义不明变异。NIPT筛查CNVs的PPV为45.65%；NIPT筛查出微缺失CNVs 17例，微重复CNVs 36例，1例微缺失合并微重复CNVs，分别占31.48%(17/54)、66.67%(36/54)和1.85%(1/54)，其PPV分别为64.29%、35.48%和100.00%。统计学分析显示，NIPT筛查微缺失CNVs和微重复CNVs的阳性率和PPV间的差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论  NIPT筛查胎儿CNVs具有较高的阳性率和PPV。当NIPT筛查为CNVs高风险时，应进行介入性产前诊断；NIPT与染色体核型分析和CMA联合应用，可为临床提供精准的遗传咨询和指导。

无创产前检测；拷贝数变异；染色体微阵列分析；阳性预测值

鞠爱萍,孟祥荣,覃燕龄,等. 无创产前检测在筛查胎儿染色体拷贝数变异中的应用价值［J］. 实用心电与临床诊疗, 2025, 34(5): 665-671.

DOI:10.13308/j.issn.2097-5716.2025.05.008

      无创产前检测（non-invasive prenatal testing，NIPT）对染色体非整倍体有较高的检出率，其目标疾病为21三体综合征（T21）、18三体综合征（T18）与13三体综合征（T13），是目前广泛用于临床一线的产前筛查技术。随着无创检测技术的发展，染色体拷贝数变异(copy number variations，CNVs)成为NIPT筛查3条目标染色体疾病以外的高频检出变异。染色体CNVs是由于基因组的结构变异，导致其表达水平显著变化，从而使人体出现一系列临床可识别的疾病。致病性CNVs的临床表型包括多器官畸形、智力发育迟缓和障碍、代谢性疾病等。目前报道的致病性CNVs大约有300种，合并发病率约0.17%。有研究表明，孕妇群体中携带致病性CNVs的胎儿占比可达1.6%~1.7%，远高于上述三种三体综合征共约0.2%的发生率。NIPT因具有无创性，可减少孕妇因侵入性诊断导致感染和流产的风险。目前临床正逐步将NIPT用于胎儿CNVs检测，但还需大样本量数据的积累，以探讨NIPT在筛查胎儿染色体CNVs中的应用价值。基于此，本研究通过回顾性分析NIPT对胎儿CNVs的筛查阳性率、阳性预测值（positive predictive value，PPV）等临床资料，探讨NIPT用于胎儿CNVs检测的临床价值，为NIPT在CNVs检测中的临床应用提供数据支持。

1.1  一般资料

      选取2019年1月至2024年12月在广州市花都区妇幼保健院进行NIPT筛查的20 378例孕妇作为研究对象。纳入标准：① 符合NIPT适应证；② NIPT提示胎儿为CNVs高风险；③ 单胎妊娠。排除标准：① 孕周<12周；② 夫妇一方有明确的染色体异常或明确携带致病性CNVs；③ 孕妇合并恶性肿瘤；④ 一年内接受过异体输血或移植手术；⑤ 接受细胞及免疫治疗者；⑥ 具有侵入性产前检测手术禁忌证者；⑦ 超声检查提示胎儿有结构异常；⑧ 有基因遗传病家族史或提示胎儿存在罹患单基因病高风险。所有研究对象在检测前均被告知风险并签署知情同意书。本研究经广州市花都区妇幼保健院伦理委员会批准。

1.2  试剂与仪器

      ABI2720扩增仪（美国ABI公司）；DA8600 DNA高通量测序仪；胎儿染色体非整倍体（T13/T18/T21）检测试剂盒购自广州市达瑞生物技术股份有限公司。采用和能生物培养基培养羊水细胞，并利用北昂BEION V4.20染色体分析系统进行核型分析。

1.3  NIPT检测

      孕妇孕12~22+6周时，选用EDTA抗凝管采集外周血10 mL，分离血浆后提取DNA。经过DNA文库构建、模板制备和扩增产物富集后，应用DA8600高通量测序仪进行测序。测序数据经过生物信息学处理后，结果判断用Z值来表示，Z值在－3.0～3.0表示低风险，Z值≥3.0或≤－3.0时被评估为高风险。对于高风险者，建议行羊膜腔穿刺术以进行产前诊断。

1.4  染色体核型分析

      对NIPT筛查为高风险的孕妇进行召回，经过遗传咨询后，同意接受产前诊断的孕妇签署手术知情同意书。行羊膜腔穿刺术进行染色体核型分析，对羊水进行双人双线培养，培养合格后加秋水仙素处理。按照标准操作流程收集细胞、常规制片、G显带和染色体核型分析。染色体核型描述按照《人类细胞遗传学的国际命名体制（ISCN2016）》进行。

1.5  染色体微阵列分析

      委托广东省妇幼保健院对NIPT显示CNVs高风险的产前诊断样本进行染色体微阵列分析（chromosomal microarray analysis，CMA）。样本经过DNA提取、NspⅠ酶消化、接头连接、PCR扩增，经磁珠法纯化、片段化，对产物进行标记、杂交后洗片，并采用美国Affy-metrix公司750K芯片检测CNVs，再利用ChAS 4.0软件进行分析及结果判读。基于本实验室数据库、相关文献和在线公共数据库（OMIM、DECIPHER、DGV、ClinGen、UCSC等）进行综合分析，判定染色体CNVs的致病性。

1.6  随访

      对NIPT检测高风险的孕妇进行召回和产前诊断，后续通过电话或查阅本院电子病历的方式进行随访，追踪记录产前检查结果，流产、引产、分娩等妊娠结局及新生儿是否有出生缺陷等资料。建议低风险孕妇接受常规产检，尤其在孕中晚期要通过超声检查密切监测胎儿的宫内生长发育情况；如果后续超声检测发现异常，则直接建议其进行产前诊断，以最大程度降低出生缺陷发生率。

1.7  数据统计分析

      采用SSPS 21.0软件进行统计学分析。以CMA结果为金标准，计算NIPT筛查CNVs高风险孕妇的阳性率、PPV等临床数据。以n（%）表示计数资料，组间比较采用χ²检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1  NIPT筛查结果

      从20 378例孕妇中，NIPT筛查出高风险196例（0.96%），包括染色体非整倍体67例、性染色体异常66例、CNVs 54例、其他染色体非整倍体9例。NIPT筛查高风险孕妇中有27例拒绝进行产前诊断；169例孕妇接受了介入性产前诊断，经染色体核型分析或CMA进一步验证，确诊T21 26例、T18 8例、T13 3例、性染色体异常24例、CNVs 21例，其PPV分别是92.86%、40.00%、18.75%、47.06%和45.65%（表1）。NIPT筛查为高风险的常染色体包括Chr2、Chr3、Chr4、Chr7、Chr8、Chr9、Chr10、Chr11、Chr13、Chr15、Chr16、Chr17、Chr18、Chr20、Chr21、Chr22。见图1。

2.2  不同类型CNVs的PPV比较

      NIPT筛查出CNVs高风险孕妇共54例，其中微缺失CNVs 31.48%，微重复CNVs 66.67%，微缺失合并微重复1.85%，具体例数分布见表2。微缺失CNVs和微重复CNVs PPV间的差异无统计学意义（χ²＝3.240，P＞0.05）。见表2。

2.3  NIPT筛查提示CNVs高风险孕妇的产前诊断结果

      在20 378例样本中，NIPT检出CNVs 54例，其中46例接受了产前诊断，8例拒绝产前诊断。在21例CNVs真阳性样本中，根据美国医学遗传学与基因组学学会（American College of Medical Genetics and Genomics，ACMG）致病性分析，最终诊断致病性变异13例（61.90%）、可能致病性变异3例（14.29%）和意义不明变异5例（23.81%）。21例CNVs真阳性样本的产前诊断结果及妊娠结局见表3。病例17经羊水产前诊断致病性评级为意义不明CNVs，其染色体核型分析和CMA结果如图2所示。

2.4  随访结果

      在NIPT筛查提示高风险的196例孕妇中，27例拒绝行产前诊断，169例进行了产前诊断，最终82例被验证为真阳性。在NIPT检出的54例CNVs高风险孕妇中，46例接受了介入性产前诊断，确诊真阳性CNVs 21例，其中，13例因胎儿CNVs存在致病性，孕妇均选择终止妊娠；3例可能致病性CNVs胎儿中，1例孕妇选择终止妊娠，2例选择继续妊娠至活产，出生时未见明显的表型异常；5例意义不明CNVs胎儿中，2例父母选择引产；2例已出生，电话随访至1岁，新生儿身高/体重、遗传代谢病筛查、神经系统发育及体重等方面均发育良好；另1例意义不明CNVs孕妇目前妊娠35周，孕期产检正常，待后续随访妊娠及胎儿出生情况。在8例拒绝行产前诊断的孕妇中，有2例孕期内胎儿胎死宫内；1例外院自行引产；其余5例胎儿出生后除1例语言发育迟缓外，其他4例胎儿出生后至今，家属自述新生儿生长发育良好，未见明显异常。随访25例假阳性样本显示，胎儿后期常规产检正常，出生后发育正常。而流产、引产孕妇因家庭经济或传统观念等原因，家属均拒绝对胎儿做进一步尸体解剖或遗传学检测。