HE染色：利用两种染料的不同特性对组织细胞进行染色，染成红蓝对比鲜明的颜色。
弹力纤维染色:利用弹力纤维与特定染料的亲和性，使弹纤维能被特异性地染成特定颜色，如维多利亚蓝染色法，使弹力纤维染成蓝色。
TTF-1染色:利用特异性抗体与组织切片中的抗原进行孵育，若组织中有TTF-1表达，抗体就会与抗原结合，经过显色结果最后通常呈现棕褐色，提示TTF-1阳性。
由于肿瘤牵拉使弹力纤维层扭曲， 并且增生的成纤维细胞、血管内皮细胞及淋巴管内皮细胞受到挤压、牵拉等物理因素作用结构变形，形似浸润的肿瘤细胞，仅通过HE染色和形态学观察难以分辨正常细胞增生和肿瘤细胞浸润，更无法判断肿瘤细胞是否突破胸膜的弹力纤维层。弹力纤维染色可以在肺组织中用于显示血管及胸膜。可以标记肺组织胸膜弹力纤维层但不能标记肿瘤细胞，因而不能明确肿瘤与胸膜的位置关系。TTF-1染色在肺腺癌中高表达，在鳞癌等其他肿瘤中通常不表达，可用于肺腺癌与鳞癌等的鉴别。当肿瘤细胞临近胸膜疑似侵犯胸膜，胸膜出现凹陷时，此时TTF-1+弹力纤维双染在同一张切片上，可同时显示处肿瘤细胞和弹力纤维，镜下可见肺组织弹力纤维被染成蓝黑色，肿瘤细胞被染成棕褐色，两种颜色对比鲜明，可以更直观判断肿瘤细胞与脏层胸膜弹力层及血管壁的关系，明确肿瘤细胞是否突破了弹力纤维层。
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改良Hammar肺癌VPI分级 |
定义 |
说明 |
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PL0 |
肿瘤局限 于胸膜下肺实质或者侵入胸膜表面结缔组织但尚为侵犯弹力层 |
PL0并不作为T分期的依据 |
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PL1 |
肿瘤侵犯超出弹力层 |
PL1和PL2均意味着脏层胸膜受侵，定义为pT2a |
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PL2 |
肿瘤侵犯达到胸膜表面 |
PL1和PL2均意味着脏层胸膜受侵，定义为pT2a |
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PL3 |
肿瘤侵犯壁层胸膜 |
胸壁的受侵犯深度与肺癌切除后的生存的复发有关。根据手术切除标本组织病理学将PT3再细分成三亚级（注意：尚未形成共识）。 pT3a：肿瘤局限于壁层胸膜（实际上PL3) pT3b：肿瘤累及胸壁内筋膜。 pT3c：肿瘤侵犯肋骨或者胸壁软组织。 |
HE染色
以下图片为HE染色和TTF-1+弹力纤维染色对比图
免疫组化染色(免疫组化机)
1.烤片1h;
2.抗原修复30min，PBS清洗三次；
3.过氧化氢阻断5min，PBS清洗三次；
4.一抗（TTF-1抗体)30min，PBS清洗三次；
5.增强试10min，PBS清洗三次；
6..二抗15min，PBS清洗三次；
6.DAB染色8min；
7.苏木素复染4min；
8.PBS返蓝；
9.脱水、透明、中性树胶封片。
单纯弹力纤维染色
1.组织片常规脱蜡至水；
2.高锰酸酸钾溶液氧化5分钟，稍水洗；
3.草酸漂白2-3分钟，至标本无色，细流水冲洗（必要时镜下控制，避免漂白过度）；
4.95%酒精稍洗，再浸入Elastin常温作用8-24小时（加盖，避免染液挥发）；
5.用95%酒精快速分化，浸洗至无多余染脱下（必要时镜下控制，避免脱色过度）；
6.细流水冲洗3-5分钟；
7.无水酒精脱水，二甲苯透明，封片胶封固。
改良前TTF-1和弹力纤维双重染色
1.免疫组化返蓝后纯水稍水洗；
2.高锰酸酸钾溶液氧化5分钟，稍水洗；
3.草酸漂白2-3分钟，至标本无色，细流水冲洗（必要时镜下控制，避免漂白过度）；
4.95%酒精稍洗，再浸入Elastin常温作用8-24小时（加盖，避免染液挥发）；
5.用95%酒精快速分化，浸洗至无多余染脱下（必要时镜下控制，避免脱色过度）；
6.细流水冲洗3-5分钟；
7.无水酒精脱水，二甲苯透明，封片胶封固。
改良后TTF-1和弹力纤维双重染色
1.免疫组化返蓝后纯水稍水洗；
2.95%酒精稍洗，再浸入Elastin常温作用8-24小时（加盖，避免染液挥发）；或者浸入Elastin水浴37度30min。
3.用95%酒精快速分化，浸洗至无多余染脱下（必要时镜下控制，避免脱色过度）；
4.细流水冲洗3-5分钟；
5.无水酒精脱水，二甲苯透明，封片胶封固。
免疫组化TTF- 1染色 弹力纤维染色
TTF-1+弹力纤维双染改良前
TTF-1+弹力纤维改良后
TTF-1+弹力纤维染色双染改良后的优点：TTF-1染色完成后，无需从高锰酸酸钾溶液氧化和草酸分化开始，可节约时间、节约耗材成本，且TTF-1染色和弹力纤维染色对比更加清晰，利于医生镜下诊断。
1、Elastin染液染色后应直接入95%酒精分化，而不经水洗，以免难分化。
2、Elastin 染液容易挥发，且染色时间长，因而须采用密封容器浸染。
3、Van Gieson 染液染色后不可水洗，否则Van Gieson染液所染上的颜色会减弱甚至洗脱。
4、Elastin染液开封后，应置于阴凉避光的密闭容器内，可重复使用，直至染液失效。
5、Elastin染液染色时也可采用37℃水浴(加盖)染色30~60分钟加速染色，但需镜下控制，以防染色过深，加热使用过的染液可重复利用的次数将减少。
6.在免疫组化与弹力纤维染色顺序上,若先行弹力纤维染色再行免疫组化染色,由于免疫组化步骤时间长,会降低弹力纤维染色效果。所以将实验步骤优化为先行免疫组化染色,再行弹力纤维染色,染色清晰鲜艳,对比度好。
7.弹力纤维染色过程采用95%酒精分化，需镜下控制避免分化过度。
1.判读肺癌胸膜侵犯时,通常需要结合弹力纤维染色切片及 HE 玻片一起判读。弹力纤维维多利亚蓝法弹力纤维被染成深紫色,但肿瘤细胞及背景中的炎症细胞、纤维细胞等不着色,肿瘤细胞显示不清,对于判断肿瘤是否突破弹力纤维层造成一定的困扰,尤其是在低分化癌中,细胞分散,难以与背景间质成分区别,是否有弹力纤维层的侵犯的判断尤为困难。
2.采用TTF-1+弹力纤维双染能同时突显肿瘤细胞和弹力纤维，易于判断肿瘤细胞和胸膜弹力层的关系，提高病理诊断的准确性。
3.采用TTF-1+弹力纤维双染技术，血管壁弹力纤维呈蓝绿色波浪状，清晰勾勒血管轮廓，肿瘤细胞呈棕褐色，不仅能观察到肿瘤细胞侵犯血管壁的情况，还能观察到血管内癌栓。另外双染技术也为人们进一步探索血管壁弹力纤维的变化，血管浸润的机制提供了新的思路和方法。
4.相比单纯弹力纤维染色法，TTF-1+弹力纤维双染优势主要体现在对比鲜明、直观清晰，便于准确判断肿瘤细胞和弹力纤维的关系，免去了单纯法阅片时需反复切换HE及免疫组化切片带来的不便，尤其对于分化差的腺癌，单个散在肿瘤细胞也能被突显出与弹力纤维关系，不易漏诊，误诊。
5.TTF-1+弹力纤维双染法，节约耗材成本，减少了组织损耗，并利于进一步推动日后关于肺腺癌与弹力纤维关系的研究。
6.免疫组化染色过程中使用3%过氧化氢以此消除内源性过氧化氢酶的影响,过氧化氢代替高锰酸钾进行前处理，过氧化氢对切片无着色，则不需要进行后续的漂白处理，而且在染色效果上同高锰酸钾处理的弹力纤维染色并无明显差异，所以改良后的TTF-1+弹力纤维双重染色节约了时长和步骤，染色效果对比更加清晰，利于医生镜下观看，反之如免疫组化后再次经过高锰酸钾氧化和草酸漂白会减弱免疫组化的效果。