大家好，今天跟大家分享一篇题为The antitu mor effects and apoptotic mechanism of 20(S)-Proto panaxadiol in acute myeloid leukemia（20（S）-原人参二醇对急性髓系白血病的抗肿瘤作用及凋亡机制）急性髓系白血病(AML)是成人最常见的白血病类型，其标准治疗方案主要为“7+3”方案(阿糖胞苷联合柔红霉素)及骨髓移植，近些年来出现的一些靶向新药，因耐药和疗效有限，患者治疗后仍易复发，亟需新的治疗策略。
01
研究背景
人参是中医中著名的草药，人参皂甙是其主要生物活性成分。其中，20（S）-原帕那唑二醇（20（S）-PPD）在多种癌症中显示出抗肿瘤作用。然而，其在急性髓性白血病（acute myeloid leukemia， AML）中的作用仍不清楚。
MTT检测评估20（S）-PPD对AML细胞增殖的影响，流式细胞术分析其对细胞凋亡的影响。采用蛋白质印迹和网络药理学分析，探讨20（S）-PPD调控AML的信号通路和蛋白表达水平。使用 RT-PCR 定量 AML 细胞中的 c-Myc mRNA 水平。
20（S）-PPD 有效抑制 AML 细胞的增殖并诱导细胞凋亡，无论是在体外还是在患者样本中。它通过抑制 PI3K/AKT/mTOR 通路和激活 PERK/ATF4/CHOP 通路来实现这一目标。此外，20（S）-PPD 主要通过降低 c-Myc mRNA 稳定性来降低 c-Myc 蛋白和 mRNA 水平。此外，将 20（S）-PPD 与 ABT-199 相结合可显着增强促细胞凋亡作用，并显着降低 AML 和阿糖胞苷耐药 （AraC-R） AML 细胞中的 c-Myc 蛋白和 mRNA 水平。这种联合疗法有望克服 AML 的耐药性并改善治疗结果。
见图一
-PPD 抑制 AML 细胞增殖并诱导细胞凋亡。
图一
（A）在AML细胞系中用0–40μM 20（S）-PPD处理后48小时进行MTT测定。
（B）测定20（S）-PPD的IC50值。在MOLM-13、MV4-11和HL-60细胞中用可变20（S）-PPD处理后24小时进行膜联蛋白V-FITC / PI染色和流式细胞术（C）或蛋白质印迹（D）。原发性AML患者样本（E）或正常PBMC（F）用指示的20（S）-PPD处理24 h，然后通过膜联蛋白V-FITC/PI染色和流式细胞术进行分析。∗，与车辆控制相比，p < 0.05。
见图二
-PPD 激活 PERK/ATF4/CHOP 通路并抑制 PI3K/AKT/mTOR 通路，同时上调 AML 细胞中的 p-ERK1/2。
图二
（A）重叠基因的KEGG通路富集分析。
（B）在MOLM-13和MV4-11细胞中进行20（S）-PPD处理后进行流式细胞术和蛋白质印迹。
（C-E）单独用 20（S）-PPD 或与 2 μM PI3K/mTOR 抑制剂 VS-5584 （C）、500 nM ERK1/2 抑制剂 SCH772984 （D） 或 500 nM PERK 抑制剂 ISRIB （E） 联合处理细胞，持续指定持续时间，然后进行流式细胞术或蛋白质印迹。∗，车辆控制< P 0.05。#、P < 0.05 个别药物。
见图三
c-Myc 介导 AML 细胞中 20（S）-PPD 的促凋亡作用。
图三
（A）用20（S）-PPD处理24 h的Bak和Bax双敲低的MV4-11细胞，然后进行膜联蛋白V-FITC/PI染色和流式细胞术分析。
（B-C）用20（S）-PPD处理MOLM-13和MV4-11细胞6 h或24 h，然后通过蛋白质印迹进行分析。
（D-E）单独用 20（S）-PPD 或与泛半胱天冬酶抑制剂 Z-VAD-FMK （D） 或 50 μM c-Myc 抑制剂 10058-F4 （E） 联合处理细胞 24 小时，然后进行流式细胞术或蛋白质印迹。∗，车辆控制< P 0.05。#、P < 0.05 个别药物。
见图四
-PPD 降低 c-Myc mRNA 水平和 mRNA 稳定性。
图四
（A）用可变20（S）-PPD处理细胞6 h，并通过RT-PCR进行分析。
（B-C）单独用 20（S）-PPD 或与 5 μM 放线菌素 D 联合处理细胞，并通过 qRT-PCR （B） 或 10 μg/mL 环己酰亚胺进行分析，然后进行蛋白质印迹 （C）。∗，车辆控制< P 0.05。
见图五
-PPD增强ABT-199在AML细胞中的抗肿瘤作用。
图五
（A）在20（S）-PPD或ABT-199处理后24 h进行MTT测定。
（B）MOLM-13和MV4-11细胞中20（S）-PPD和ABT-199的CI值。
（C-E）MOLM-13 和 MV4-11 细胞单独或联合用 20（S）-PPD 或 ABT-199 处理 6 小时，然后进行流式细胞术 （C）、qRT-PCR （D） 或蛋白质印迹 （E）。
（F）慢病毒介导的c-Myc敲低（KD），以非靶标对照（NTC）为阴性对照，Western blotting进行验证。用指示药物处理对照或 KD 细胞 6 小时，然后进行流式细胞术分析。∗，车辆控制< P 0.05。#、P < 0.05 个别药物。
见图六
-PPD 和 ABT-199 在 AraC 耐药 （AraC-R） 细胞中的协同抗肿瘤作用。
图六
（A）在MV4-11 / AraC-R细胞中用20（S）-PPD或ABT-199处理后48小时进行MTT测定，图说明了两种药物的CI值。
（B-D）用 20（S）-PPD 或 ABT-199 单独或联合处理细胞 6 小时，然后进行流式细胞术 （B）、qRT-PCR （C） 或蛋白质印迹 （D）。
（E）蛋白质印迹法用于验证MV4-11/AraC-R细胞中的c-Myc敲低。对照细胞和川崎病细胞均用指示药物处理6 h，然后通过流式细胞术进行分析。∗，车辆控制< P 0.05。#、P < 0.05 个别药物。
02
研究结论
本研究证明了 20（S）-PPD 在 AML 中的有效抗肿瘤活性，并阐明了其潜在机制。值得注意的是，20（S）-PPD 对 AML 细胞表现出显着的抗肿瘤作用，无论是作为单一药物还是与 ABT-199 联合使用，都显示出显着的协同作用。这些结果表明了一种有前途的 AML 治疗新治疗策略。
好了，今天的文献解读就到这儿来，我们下期再见！如果你正在开展临床研究.需要方案设计.数据管理. 数据分析等支持.也随时可以联系我们。