大家好，今天跟大家分享一篇题为Basophil-derived exosomes exacerbate systemic lupus erythematosus by regulating B-cell proliferation via miR-24550（嗜碱性粒细胞衍生的外泌体通过miR-24550调节B细胞增殖加剧系统性红斑狼疮）B细胞的增殖与活化是驱动系统性红斑狼疮(SLE)进展的关键环节，嗜碱性粒细胞在SLE病理过程中的免疫调节作用已被初步认知(如通过IgE免疫复合物激活、调控免疫细胞迁移等)，而外泌体可携带非编码RNA(如miRNA)、蛋白质等分子调控靶细胞功能。
01
研究背景
系统性红斑狼疮 （SLE） 是一种复杂的自身免疫性疾病，其中 B 细胞增殖和激活在发病机制中起关键作用。虽然嗜碱性粒细胞在系统性红斑狼疮中的作用已得到认可，但嗜碱性粒细胞衍生的外泌体对 B 细胞增殖和活化的影响尚未得到彻底研究。
嗜碱性粒细胞来源的外泌体miR-24550通过靶向KLF5促进B细胞增殖和活化，从而加剧SLE进展。本研究提出了一种预防和治疗 SLE 的新策略。
见图一嗜碱性粒细胞来源的外泌体可增强 SLE 患者 B 细胞的存活和增殖。
图一
A CD123+ CD203c+ 嗜碱性粒细胞纯度的流式细胞术分析。
B 人嗜碱性粒细胞中 CD203c 表达的流式细胞术分析。
C 人嗜碱性粒细胞中 CD203c 表达的统计分析 （n = 6）。
D 人嗜碱性粒细胞形态的透射电镜图像。
E 人嗜碱性粒细胞及其外泌体的蛋白质印迹分析。
F 人嗜碱性粒细胞来源的外泌体形态的透射电镜图像。
G 嗜碱性粒细胞来源的外泌体大小的纳米颗粒跟踪分析。H CD19+ B 细胞纯度的流式细胞术分析。
I 嗜碱性粒细胞来源的外泌体和 B 细胞共定位的免疫荧光分析。
J B 细胞存活的流式细胞术分析。
K B 细胞增殖的流式细胞术分析。
L B 细胞存活率的统计分析 （n = 4）。M B 细胞增殖的统计分析。结果显示为 SEM ±平均值 （n = 4）。
见图二
嗜碱性粒细胞来源的外泌体迁移到 Pristane-Mcpt8flox/flox、CAGGCre-ERTM 狼疮小鼠的脾脏和肾脏。
图二
A Mcpt8flox/flox、CAGGCre-ERTM 小鼠嗜碱性粒细胞和外泌体转移的时间表。
B Mcpt8flox/flox、CAGGCre−ERTM 小鼠构建示意图。
C Mcpt8flox/flox、CAGGCre-ERTM 小鼠外周血嗜碱性粒细胞比例的流式细胞术分析。
D 流式细胞术门控，用于从小鼠骨髓中分选诱导的嗜碱性粒细胞。
E 分选后小鼠嗜碱性粒细胞纯度的流式细胞术分析。
F 小鼠嗜碱性粒细胞外泌体大小的纳米颗粒追踪分析。
G 小鼠嗜碱性粒细胞及其外泌体的蛋白质印迹分析。
H 小鼠嗜碱性粒细胞外泌体形态的透射电子显微镜。I Pristane-Mcpt8 flox/flox、CAGGCre-ERTM狼疮小鼠嗜碱性粒细胞来源外泌体分布的免疫荧光分析
见图三
嗜碱性粒细胞来源的外泌体加剧了Pristane-Mcpt8flox / flox，CAGGCre-ERTM狼疮小鼠的疾病进展。
图三
A 小鼠血浆抗核抗体的统计分析（n = 4）。
B 小鼠血浆抗dsDNA抗体的统计分析（n = 4）。
C 小鼠脾脏的形态学分析。
D 苏木精和伊红（H&E）染色小鼠脾脏病理分析。
E 小鼠脾脏浆细胞和浆母细胞比例的免疫荧光染色分析。
F 小鼠 24 小时尿蛋白水平的统计分析 （n = 4）。
G 小鼠尿素水平的统计分析 （n = 4）。
H 小鼠肌酐水平的统计分析 （n = 4）。I H&E、PAS和MASSON小鼠肾脏病理学染色分析（n = 4）。
J 小鼠肾脏中 IgG 和 C3 沉积的免疫荧光染色分析。结果显示为SEM±平均值。通过单因素方差分析分析A、B、F、G和H。*P < 0.05;**P < 0.01;市< 0.001。
见图四
嗜碱性粒细胞衍生的外泌体中的 MiR-24550 对其功能至关重要。
图四
A miRNA 差异表达热图（红色表示上调，绿色表示下调，表达量越高，颜色越亮）。
B miRNA差异表达火山图（横轴：倍数变化;纵轴：P值）。
C 激活前后嗜碱性粒细胞来源的外泌体中miRNA的相对表达水平（n = 3）。
D 活化嗜碱性粒细胞来源的外泌体中miRNA的相对表达水平。
E 用于检测 CD19+ B 细胞的流式细胞术门控方案。
F 阴性选择前后CD19+ B细胞纯度的流式细胞术分析。健康志愿者和 SLE 患者 B 细胞中的 G miRNA 表达水平 （n = 3）。
H 嗜碱性粒细胞激活后 miR-24550 表达水平的变化 （n = 3）。
I 活化嗜碱性粒细胞来源的外泌体与 SLE 患者的 B 细胞共培养后 B 细胞中 miR-24550 的相对表达水平 （n = 3）。结果显示为SEM±平均值。C和G通过独立样本t检验进行分析。我通过配对 t 检验进行了分析。*P < 0.05;**P < 0.01;市盈率< 0.001
见图五
MiR-24550 促进 B 细胞分化和激活。
图五
A 阴性选择前后CD19+ B细胞纯度的流式细胞术分析。
B qPCR 分析 miR-24550 在 B 细胞中过表达效率 （n = 5）。
C TUNEL检测miR-24550过表达对B细胞细胞凋亡的影响。
D miR-24550过表达对B细胞细胞凋亡影响的统计分析（n = 5）。
E 流式细胞术分析miR-24550过表达对B细胞活化标志物CD80和CD86表达的影响。
（F）miR-24550过表达对B细胞活化标志物CD80和CD86表达影响的统计分析（n = 5）。
G miR-24550过表达对B细胞增殖标志物Ki-67表达影响的流式细胞术分析。
H miR-24550 过表达对 B 细胞增殖标志物 Ki-67 表达影响的统计分析 （n = 5）。
I miR-24550 过表达对记忆 B 细胞亚群影响的流式细胞术分析。
J miR-24550 过表达对记忆 B 细胞亚群 （n = 5） 影响的统计分析。
K miR-24550 过表达对浆细胞和浆母细胞影响的流式细胞术分析。
l miR-24550过表达对浆细胞影响的统计分析（n = 5）。M miR-24550 过表达对浆母细胞影响的统计分析 （n = 5）。结果显示为SEM±平均值。B采用单因素方差分析。采用独立样本t检验对D、F、H、J、L和M进行分析。
见图六
人源化SLE小鼠模型的构建。
图六
A 人源化SLE小鼠模型构建程序。
B SLE 患者 B 细胞中 miR-24550 过表达和敲低效率的 B qRT-PCR 分析 （n = 3）。
C 人源化SLE小鼠骨髓中CD19 + B细胞的流式细胞术分析。
D 人源化SLE小鼠骨髓浆母细胞（PB）的流式细胞术分析。
E 人源化SLE小鼠骨髓记忆B细胞的流式细胞术分析。
F 人源化SLE小鼠骨髓中PB比例的统计分析（n = 4）。
G 人源化SLE小鼠骨髓中开关记忆（SM）B细胞比例的统计分析（n = 4）。
H 人源化SLE小鼠骨髓中未切换记忆（UM）B细胞比例的统计分析（n = 4）。
I 人源化SLE小鼠骨髓中幼稚B细胞比例的统计分析（n = 4）。结果显示为SEM±平均值。B、F、G、H和I通过单因素方差分析进行分析。
02
研究结论
总体而言，这些发现表明，来自嗜碱性粒细胞来源的外泌体的 miR-24550 通过抑制 KLF5 表达来增强 B 细胞活化，并为 SLE 发病机制提供新的见解，同时可能提供新的预防和治疗策略。这些发现凸显了在 SLE 背景下靶向嗜碱性粒细胞-外泌体相互作用的重要性，以及 miR-24550 作为该疾病框架内 B 细胞生物学关键调节因子的潜力。
好了，今天的文献解读就到这儿来，我们下期再见！